32
33
球 菌 属 的 某 些 菌
微
杆 菌 非 芽 孢 杆 菌
菌
浅 金 黄 色 单 胞
洋 葱 假 单 胞 菌
球 形 芽 孢 杆 菌
B/A grade Bacteria ID Results
Micrococcus
G+ Chryseomonas luteola Burkhol cepacia Bacillus sphaericus Bacillus pumilus Bacillus firmus Bacillus cereus Bacillus mycoides Aer.hydrophila gr.l
– 可氧化物质 – 溶剂系统中的重量变动 – 析出物分析，吸附分析 – 完整性试验 – 流量变化 – 外观物理变化 – 生物截留能力
38
过滤器的完整性试验
• 目的是确定过滤系统不存在使液体不经过过滤介质到达过
滤器下游的通道
压力表
– 起泡点试验
– 前向流试验（扩散流）
注: 上游：压力表 下游：流量计
12
FDA新药申报资料对无菌药品工艺验证的要求
• 原则：只有当药品的检验方法、生产设施、工艺流程、包 装等能确保药品的性质、含量、质量和纯度时，药品申请 才会被批准
• 资料要求：无菌药品的工艺验证必须包含在申报资料中 • 两级责任制：
– CEDR负责资料的审核 – 地方药监负责现场检查
• 目的1：申报资料的真实性 • 目的2：GMP符合性检查
更衣间 清洁/灭菌间
其他C级区房间
测试项目 空气悬浮粒子*
空气浮游菌 表面微生物
沉降菌 空气悬浮粒子*
空气浮游菌 表面微生物
空气悬浮粒子 空气浮游菌 表面微生物
监测频率 每周一次 （*每月一次）
每周一次 （*每月一次）
每月一次
25
辅助区环境监测频率
洁净室 辅助区所有房间
测试项目
空气悬浮粒子 空气浮游菌 表面微生物
7
二、无菌生产工艺验证原则与申报资料要求
无菌生产工艺验证原则 以无菌保证为核心，在充分评估工艺各步骤微 生物污染风险的基础上，利用现有的科学技术， 对风险控制手段的有效性进行确认
8
无菌冻干粉针剂生产工艺流程
过滤器及安装操作， 过滤前溶液含菌量
气体，容器管道
环境，人员操作， 转移
配料
原料，辅料，配料器具，环境，人员操作
原材料
生产过程
产品
水 原料药 辅料 气体 容器/密封件
设备 容器、设备的清洗灭菌 配料、过滤、灌装全过程 人员 环境及培养基灌装
无菌试验 无菌包装
10
遵循的法规要求
• 中国GMP有关无菌生产工艺的有关规定以及洁净室悬浮粒子、 沉降菌和浮游菌检测的国家标准
• 《药品生产质量管理规范实施指南》中有关无菌生产的指导 原则
23
无菌灌装区环境监控频率
洁净室
测试项目
监测频率
无菌灌装间 产品转移间 灭菌釜卸载间
更衣间
产品转移间 清洁间
物流缓冲间 更衣间
空气悬浮粒子 空气浮游菌 表面微生物
沉降菌 操作人员 空气悬浮粒子 空气浮游菌 表面微生物
每批一次或无生产 时每周一次
每周一次
24
物料准备区环境监控频率
洁净室 配液间 压盖间
FDA《无菌生产工艺指南》第五页
22
制订环境监控方案的原则
• 明确监控的关键控制点
– 给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置、直接接触表面 – 人员
• 科学建立控制标准和方案
– 标准应满足无菌生产微生物控制要求，并结合取样点位置和生产操 作的相互关系
– 建立警戒和纠偏标准 – 进行数据分析
• 全面监控、动态监控 • 定期的环境再验证
• 无菌生产工艺
–药品的各个部件（产品，容器和密封件）分别经过灭菌 处理，再在高洁净度的环境中组装最终产品，但产品装 入其最终容器后不再进行灭菌处理。
6
如何制造出高质量的无菌药品？
• 对生产工艺的深刻理解 • 识别、评估各工艺步骤对无菌性，热源，微粒等
质量因素及其影响程度 • 在工艺过程中采取有效控制手段（控制点） • 对这些手段的有效性进行验证 • 遵循相关法规的要求
法 • 生产用水需要达到纯化水要求，并控制内毒素 • 对除菌、灭菌或去内毒素步骤需评估对产品理化
性能的影响
19
3.2 生产环境验证和控制
• 范围包含所有工艺步骤 • 遵守相关的GMP规范 • 验证是考察静态和动态时的环境质量 • 生产时实行动态监控
20
环境验证的范围
• 空气净化系统的验证（温湿度，压差，空气 流向，风速，高效过滤器泄漏测试）
手术、烧伤及严重创伤 眼部给药 耳、鼻及呼吸道吸入 阴道、尿道给药 直肠给药
4类-含动物组织的口服制剂 5类-兼用途径
3
注射剂的风险 风险1-微生物污染 风险2-热源的污染 风险3-不溶性微粒 风险4-纯度
其他风险 安全性（组织的刺激性，毒性反应） 渗透压 pH
13
FDA新药申报资料对无菌药品工艺验证具体内容要求（1）
• A.厂房和设施
– 布局图，包括洁区划分 – 设备分布图
• B.总体生产流程介绍
– 产品过滤 – 溶液储存时间 – 关键操作
• C.容器、密封部件、设备和器具的灭菌去热源过程
– 分别灭菌溶液的工艺过程 – 完整的批生产记录
14
FDA新药申报资料对无菌药品工艺验证具体内容要求（2）
17
3.1 原辅料的控制
• 无菌原料药
– 其本身的生产工艺应按无菌生产工艺验证原则 进行
– 包装和运输应是考察重点
• 非无菌原料或辅料
• 尽可能降低微生物负荷- ＜50 CFU/g • 生产的洁净环境 • 设备与其他物料及人员 • 生产用水
18
非无菌原料或辅料关键控制点
• 精烘包阶段环境至少十万级以上 • 人员着装、人流物流控制，环境清洁规程 • 设备清洁规程，设定内控限度 • 预先采取高温或过滤是降低微生物污染的有效方
34
3.3 过滤系统的验证
• 无菌过滤是截留微生物 • 具有一定的风险
– 制造过程中的不均一性 – 对过滤介质的化学腐蚀 – 机械缺陷 – 过高的压力
35
过滤器验证项目
化学性能 • 兼容性 • 析出物
物理性能 完整性
-产品/水起泡点 -扩散流 吸附
过滤器选择考虑要点： 1. 是否起到无菌过滤的作用 2. 是否产生额外的物质（析出物） 3. 是否吸附了主药（药液） 4. 过滤器的稳定性如何，能否保证在整个过滤
• E.培养基灌装失败时的措施 • F.环境监测
– 应用的微生物方法 – 监测酵母菌、霉菌和厌氧菌的方法和频率 – 超标时的措施
• G.密封系统完整性 • H.无菌检查方法和放行标准 • I.内毒素检查方法 • J.有关上述所有内容的文件列表
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三、无菌生产工艺验证的具体内容和方法
• 厂房和设施（布局、空气净化系统包括HEPA,WFI系统） • 器具、容器的灭菌除热原过程 • 灌装部件、胶塞的灭菌过程 • 洗瓶、干热去热原过程 • 配液罐、储液罐及管道、冻干机灭菌过程 • 过滤除菌过程 • 灌装过程（环境、人员监测） • 容器密闭性 • 综合验证：培养基灌装试验（工艺模拟实验） • 实验室控制（微生物测试标准方法、无菌检查）
Wall
Floor
ISP Room 17 Enviromental Trending 2004-5~2005-3
CFU/m3 or CFU/25m3
7 6
5 4 3 2 1 0
2004-5
2005-3
31
细菌鉴定
• 确定污染源，为制订整改措施提供帮助 • 提供放行/报废依据 • 用于培养基灌装 • 用于消毒剂的效率测试
若压力不到指标，就 产生起泡，就可能有
渗漏
压力表
滤芯 流量计
39
无菌过滤器微生物挑战试验
• 目的：证实过滤器是有能力截获微生物，而且超过了工艺 物流自身最大的生物负荷
• 模拟实际工艺的压力流量等参数 • 菌种：缺陷型假单胞菌 • 数量：按过滤器面积107个/cm2 • 步骤
28
人员控制
• 无菌服、头套、眼罩、人员操作行为 • 无菌灌装人数控制 • 人员资格认定
– 体检，操作培训，着装培训，着装测试 • 着装测试方法 • 年度资格再确认制度
29
洁净室工作人员取样点分布图
1
2
3
6
5
4
1
4
5
3
2 6
1
2 4 5
6 3
眼罩也为取样点 30
环境监测数据的分析
Airborne 杆 菌 属
蜡 状 芽 孢 杆 菌
草 状 芽 孢 杆 菌
嗜 水 气 单 胞 菌
0
10
20
30
80
Bacteria ID Results (灌装区细菌鉴定结果) Jul.01~Nov.04
G+球菌 G-杆菌 G-球菌 霉菌 芽孢杆菌 G+非芽孢杆菌
77% （主要来源于人） 8% 5% 1% 5% 4%
配液
无菌过滤
氮气保护条件下储存待 灌装
灌装
容器，WFI，配料容器，环境，操作
物料准 备
洗瓶
胶塞，过滤器， 灌装部件，清洁 工具，灭菌釜， 清洁及灭菌过程
西林瓶，WFI， 洗瓶机，干热灭 菌设备
冻干干燥，压橡胶塞
冻干机密闭性
压铝盖 灯检
压盖前储存时间，转 移，胶塞密闭性，压 盖后的密闭性
9
无菌工艺无菌性的保证因素
• 《药品生产验证指南》 • FDA《无菌生产工艺指南》 • FDA《工艺验证一般原则》《新药申报资料对灭菌工艺验证的