超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定方法
一、试剂
1. 0.1mol/L HCl
2. 10mmol/L HCl
3. 0.1mol/L Tris标准溶液:12.114g三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水,并定容至1000ml.
4. 50mmol/LTris缓冲溶液:L Tris标准溶液中加入L HCl ~,定容至100ml,PH为。
5.30mmol/L邻苯三酚盐酸溶液:3.7833g邻苯三酚溶于10mmol/LHCl中,并用10mmol/LHCl定容至1000ml.
二、仪器
1. 紫外分光光度计
2. 酸度计
3. 恒温水浴锅
三、操作方法
1.邻苯三酚自氧化速率测定
在试管中加入50mmol/LTris缓冲溶液,于25℃保温20min,加入10~20ul 30mmol/L邻苯三酚,立即计时并摇匀,倾于比色杯内,于325nm下,每隔1min测吸光值一次,空白以10mmol/L HCl代替邻苯三酚,要求自氧化速率控制在OD/min左右。
活性测定
将样液加入到Tris缓冲溶液中,其余步骤同自氧化速率测定方法。
活力单位定义:将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位(u)。