各管抗体量不变
Ab
振摇 混匀、37℃孵育
Ag
沉淀量不同
出现沉淀量最多的管为最免疫适沉比淀试例验管。 1/11/2021
轻摇
10
最适比方阵测定法
抗原稀释度
抗体
稀释度
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640
对照
1/5
+
++ +++ +++ ++
+
±
—
1/10
+
++
++
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免疫沉淀试验
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透射比浊试验和散射比浊试验光路
IC
透射比浊试验
I
检测器A
I0
θ
当复合物＜3×106dal，
I≈Iθ;θ＜90°，散射光的
量代表IC的量。
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免疫沉淀试验
Iθ 检测器B
散射比浊试验
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补充：免疫浊度测定影响因素
（1）抗原抗体的比例：反应体系保持抗体过量
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免疫沉淀试验
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（2）抗体的质量
•抗体的特异性 •抗体的效价(>1:20) •抗体的亲和力 •R型和H型抗体（R型）
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免疫沉淀试验
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（3）抗原抗体反应的环境 最适PH为：6.5-8.5 离子强度大，IC形成快 离子种类的影响，常用磷酸盐缓冲液 （4）增浊剂 PEG(6000—8000) 浓度4%吐温-20
24～48h观察沉淀
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免疫沉淀试验
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Mancini曲线
Fahey曲线
T以1为上1,1/6可11-/202见214hT3；为T直2为线2，4-T418为h；反抛T3为物免疫4线8沉h淀试t4物18验为线h以1上6-,2可4h见；tt1为2 为直2线4-，48th3；为反t293 抛为
待检蛋白质抗原须具备的条件
仅针对某待测抗原的单价特异性抗血清 已知含量的标准品 待测品含量在1.25g/ml以上
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免疫沉淀试验
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一、单向免疫扩散试验
单向扩散试验
上排为5个不同浓度的参考品；
下排为患者血清，下免疫排沉淀右试验2为异常病理血清
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应用
IgG、IgA、IgM、C3、C4、 转铁蛋白、抗胰蛋白酶、糖蛋白和前白蛋白
免疫沉淀试验
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一、单向免疫扩散试验
定量试验
原理：抗体与待测的抗 技术要点：
原,在两者比例合适的
部位结合形成沉淀环。
环的大小与抗原的浓
度成正相关。
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免疫沉淀试验
1.制板 2.打孔 3.加样 4.扩散 5.绘制标准曲线 26
一、单向免疫扩散试验
倾注平板
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打孔
加样免疫放沉环淀置试3验7℃
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免疫沉淀试验
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优 点：
稳定性好、简便快速，易于自动化 敏感度高 精确度高 无放射性核素污染
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免疫沉淀试验
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分 类：
1.根据反应的时间和反应结合的动力学分为 速率比浊法 终点比浊法 2.根据检测仪器的位置及光信号性质分为 透射免疫比浊法 散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法
第六章 免疫沉淀试验
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免疫沉淀试验
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教学目的
掌握：液相内沉淀试验、凝胶内沉淀试验 原理
熟悉：沉淀反应的特点、免疫电泳技术、 沉淀反应的应用
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免疫沉淀试验
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第一节 免疫沉淀试验的基本原理
一、基本原理
免疫沉淀反应（immunoprecipitation
reaction）指可溶性抗原与相应抗体在
等多种血浆蛋白的检测
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免疫沉淀试验
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二、双向免疫扩散试验
技术要点：
1.制板
2.打孔
3.加样
4.扩散
++ +++ ++
+
—
1/20
+
++
++
++ +++ ++
+
—
1/40 —
±
+
+
++
++ +
++
—
1/80
—
—
—
—
+
+
+
—
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免疫沉淀试验
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二、免疫浊度测定
原理： 当可溶性抗原与相应抗体特异结合，
二者比例合适时，在增浊剂中它们 快速形成一定大小的抗原抗体复合 物，使反应液体出现浊度。
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免疫沉淀试验
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原理
可溶性抗原和相应抗体在凝胶中 扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体 相遇并且浓度比例适当的位置形成 肉眼可见的沉淀线或沉淀环。
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免疫沉淀试验
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反应介质：凝胶
凝胶的特点：
1、固相的液体
2、多孔的网状结构
3、Ag-Ab复合物网络在凝胶 中
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（2）抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力 强，并使用R型抗体
（3）抗原抗体反应液的环境：最适PH为6.5-8.5
（4）增浊剂
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免疫沉淀试验
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（1）抗原抗体的比例
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免疫沉淀试验
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海德堡曲线
在抗体过量的反应体系中,抗原量的递 增与比浊定量成正比,当抗原抗体比例合 适时反应达峰值,而当抗原过量时,形成的 免疫复合物分子小,浊度反而下降的一个 抛物曲线。
免疫电泳技术
免疫浊度测定
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免疫沉淀试验
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三、 免疫沉淀试验的特点
1. 阶段性 2. 特异性 3. 抗原性质：可溶性 4. 抗体的选择：2价
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免疫沉淀试验
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第二节 液体免疫沉淀试验
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免疫沉淀试验
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第二节 液体免疫沉淀试验
一、絮状免疫沉淀试验
絮状免疫沉淀试验是将抗原与相应
抗体混合，在电解质存在的条件下，
抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状
沉淀物。
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免疫沉淀试验
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一、絮状免疫沉淀试验
抗原稀释法：抗原最适比例
抗体稀释法：抗体最适比例
方阵滴定法：抗原抗体最适比例
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免疫沉淀试验
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絮 状 沉 淀 示意图
各管抗原倍比稀释
Ag
加入抗血清
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128
适当条件下发生特异性结合而出现的沉
淀现象。
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免疫沉淀试验
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沉淀反应分两个阶段
第一阶段
第二阶段
抗原抗体特异性结 形成肉眼可见的大的 合，快速但不可见 免疫复合物。
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免疫沉淀试验
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二、免疫沉淀试验的分类
液体内 沉淀试验
凝胶内 沉淀试验
环状ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ淀试验
免疫扩散试验
絮状沉淀试验
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免疫沉淀试验
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伪浊度形成的原因
1.抗血清中有非特异性的交叉反应性杂 抗体成分
2.增浊剂浓度和反应时间掌握不当
3.样品本身的浊度处理不当
4.试剂污染变质
5.比色杯不够清洁
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第三节 凝胶内免疫沉淀试验
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免疫沉淀试验
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第三节 凝胶内免疫沉淀试验