4大经典免疫实验
（3）补体结合反应 （4）中和反应 （5）免疫标记技术
实验一 凝集反应
一、目的要求
1.掌握血清学反应概念、特点。 2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应 的实验方法及结果判定。 3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。
二、实验内容 1.直接凝集试验(玻片法)
——ABO血型鉴定(每人做) 2.间接凝集试验
在白背景 上观察
凝集
不凝集
3.结果判断 凝集者：出现红色颗粒状或块状凝集物； 不凝集者：呈红色均匀混浊。
(1)若抗A凝集，抗B不凝集 —— A 型血 (2)若抗A不凝集，抗B凝集 —— B型血 (3)若抗A、抗B均凝集 —— AB型血 (4)若抗A、抗B均不凝集 —— O型血
4.注意事项 (1)适度的RBC悬液浓度，约2-5%； (2)抗A和抗B不能混用； (3)在白色背景上观察效果较好。
二、免疫实验课目的 1.验证所学理论知识。 2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。
三、要求 1.严肃认真。 2.多想、多看、多做。 3.当堂完成实验报告。
四、Ag-Ab反应的相关知识 血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。 由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故
称之为血清学反应。 1.Ag-Ab反应的基本原则 （1）用已知抗体检测未知抗原； （2）用已知抗原检测未知抗体。
A型
A
抗B
B型
B
抗A
AB型 O型
A、B —
— 抗A、抗B
1.材料 已知Ab：标准血清 —— 抗A、抗B 待测Ag：红细胞血型抗原
2.操作步骤
(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形成约 2～5%红细胞(RBC)悬液；
(2)准备1张载波片； (3)加血清(Ab)各1滴； (4)加RBC各1滴； (5)摇晃混匀； (6)结果判断(10-15分钟后)。
透明，如蛋白质、多糖抗原等。
（二）凝集反应类型
1.直接凝集反应
2.间接凝集反应
1.直接凝集 ——玻片法 已知Ab,测Ag，为定性实验； 用途：鉴定菌种、菌种分型、血型鉴定。 ——试管法（如肥达氏反应） 已知Ag,测Ab，为半定量实验； 用途：辅助诊断肠热症等。
2.间接凝集反应
RBC——间接血凝试验 用途：某些病毒感染和变态反应患者血 清中的相抗体量。
乳胶——间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。
间接凝集抑制试验 ——妊娠试验
（已知） （已知）
（已知） （已知）
反向间接凝集试验 ——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。
四、实验操作内容
（一）玻片法—— ABO血型鉴定（每人做）
用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。
ABO血型系统
血型 红细胞表面的血型Ag 血清中的血型Ab
阳性者现象：呈乳白色细沙状（乳胶凝集）； 阴性者现象：呈乳白色均匀混浊。
完成实验报告
实验一 凝集反应
一、直接凝集反应（玻片法）—— ABO血型鉴定 1.材料 2.操作步骤 3.结果判断（自己的血型） 4.实验讨论
二、间接凝集反应——类风湿因子测定 1.材料 2.操作步骤 3.结果判断（自己的血型） 4.实验讨论
非临床医学本科实验内容及安排
实验课内容
1 凝集反应 2 沉淀反应 3 免疫标记技术
学时数 4 4 4
录像
有 有
一、免疫学实验注意事项 1.学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。 2.学生在实验过程中应遵守实验操作规程和实验室 秩序，按要求完成实验。 3.学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约； 若损坏实验用品，要及时报告。 4.需回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸 内；废弃的使用品仍-入垃圾桶内。 5.实验结束，清理好桌面，由班干部安排值日学生 做清洁；做完清洁，关好水电、门窗，由带教老师检 查认可后，值日学生方可离去。
思考题 1.试述血清学反应、凝集反应的概念。 2.简述凝集反应的类型、用途及实例。 3.如何判断ABO血型检测结果？
2. Ag-Ab反应的特点： （1）特异性 （2）可逆性 （3）可见性
可见性 Ag-Ab比例合适，形成大分子免疫复合物。
出现肉眼可见的凝集物
3.影响Ag-Ab反应的因素 （1）电解质：0.85% NaCl （2）酸碱度：pH6～8 （3）温度：37℃
4.Ag-Ab反应类型：
（1）凝集反应 （2）沉淀反应
免疫学实验
（ 供临床医学本科用）
Email: lnh666"
教材
高等医学院校基础医学实验教学系列教材 ≪免疫学实验≫
科学出版社，2008年6月 主编
朱道银，吴玉章
临床医学本科实验内容及安排
实验课内容
1 凝集反应 2 沉淀反应 3 免疫标记技术 4 免疫酶斑点试验
学时数
4 4 4 4
录像
有 有 有
（二）间接乳胶凝集试验 —类风湿因子检测 类风湿关节炎患者血清中存在： 变性IgG — Ag 抗变性IgG抗体(类风湿因子) — Ab 临床上用检测类风湿因子以辅助诊断
类风湿关节炎。
1.材料 已知Ag：致敏乳胶(乳胶颗粒表面有变性IgG) 待测Ab：待检血清中的类风湿因子
待测Ab
已知
2.检测步骤： (1)取黑底纸片三片； (2)加待测血清、阳性和阴性对照血清各1滴； (3)各加1滴致敏乳胶,用牙签混匀； (4)5分钟后观察结果，以黑背景观察为佳。
——类风湿因子检测(小组做)
三、凝集反应相关知识
（一）概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结
合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物， 称为凝集反应。
颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素
· 颗粒性抗原： 光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬
液，如细菌、RBC等。
· 可溶性抗原： 光镜下无形态，肉眼观呈澄清