核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核 糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA 主要分布在核 的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA 分布在细胞质和核仁内。但在 染色质及染色体中也含有少量的 RNA，核仁中也有少量的 DNA。在线粒体，叶绿 体等细胞器内除含有 RN 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
3．淀粉：取一块马铃薯，用徒手切片法，切成薄片，将薄片放于载玻片上的 水滴中，加盖玻片后即可观察，先观察一下淀粉粒的形状及在细胞内的分布，然 后在加碘液染色 5 分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖片观察。 四、习题
1、DNA 的显示法-Feulgen 反应 2、压片法 3、细胞有丝分裂相的观察 四、实验仪器、材料和试剂 1、仪器：显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、 解剖针、酒精灯、试管、烧 杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。 2、材料：洋葱鳞茎、根尖 。
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（2）硝酸银溶液：
硝酸银
1.5g
蒸馏水
100m
（3）还原剂：
对苯二酚
1—2g
中性福尔马林
15ml
亚硫酸钠
0.1—0.5g
蒸馏水
100ml
2．镀银步骤
（1） 固定：在硝酸钴溶液中固定 10—24 小时，但不宜超过 24 小时；
（2） 蒸馏水快洗；
（3） 室温下在硝酸银溶液中放置 36—48 小时；
（4） 蒸馏水冲洗；
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高尔基体
高尔基体显示的方法，目前使用较多的是： 1．固定染色法。1889 年 Golgi 用镀银的方法显示出这种细胞器，目前仍应 用 AgNO3 或饿酸处理材料，将高尔基体显示为棕黑色。这是由于 AgNO3、饿酸在 高尔基体的部位被还原之故，所以显出高尔基体的形态及其在细胞内的分布。常 用的方法有 DaFano 硝酸钴-硝酸银镀银法，Aoyama 镀银法及 Romony Cajal 镀银 法等，而欲显示其细胞结构，就得使用电镜技术。 2．活体染色法。将中性红配制成一定的浓度，对细胞进行活体染色，以显 示高尔基体。但此种显示高尔基体的方法，仍不如詹纳斯绿显示线粒体的方法更 为广泛。因为中性红只能染高尔基体的液泡部分，因此有一定的局限性。 一、目的与要求
先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注 意细胞核位于细胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中
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有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。 3．电镜照片的观察
观察了光学显微镜的线粒体以后，在观察线粒体的电镜照片。在电镜照片上， 可以看到，线粒体不是一个简单的杆状或颗粒状，从切面看它是一个具有双层膜 的小囊：外膜完整、内膜连续不断地向线粒体的基质褶入，形成一些列双膜的嵴 （cristae）. 嵴的形状和数目随细胞不同而异。可以说线粒体是一个复杂的膜 系统。 （二）高尔基体
（5） 还原剂中还原，8—24 小时；
（6） 蒸馏水洗，快步脱水，透明，包埋；
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（7） 切片—帖片—脱蜡到水—封片； （8） 镜检，高尔基体呈黑色，细胞质呈黄色。
实验二 DNA 显示和细胞有丝分裂相的观察
配制时间：宜在使用时配制新鲜液，不可久存。 （2）鼠肝细胞线粒体的活体染色：剪断颈动脉，放血处死小鼠，剖腹，取出肝 脏，放在滴定板上。沿肝脏边缘，用刀片切取 2—3mm 厚的切片，置滴定板的凹 孔内。加 2—3 滴 1/10000 浓度的詹纳斯绿染液，染色 20—30 分钟。取出肚脏， 用生理盐水洗去染料，再用刀片切取很薄的小片，置载片上。滴一滴生理盐水于 肝切片上，加上盖玻片，再放上一张小滤纸，用拇指猛压载片，使细胞分离或压 碎。
观察时，先在低倍镜下找到完整的肝细胞，再在高倍镜下观察细胞质内的线 粒体。 （3）洋葱鳞片表皮细胞线粒体的活体染色：取一载玻片，在其中央加一滴 0.5% 詹纳斯绿染液。用镊子从洋葱鳞片的内表面撕下一小块表皮，放在载玻片上的染 料中，并使其展开，染 5—10 分钟，用吸管吸取蒸馏水，滴于染色的载玻片上， 使染液冲淡，最后使标本周围液体近于无色。此时，用镊子取一盖玻片，先将它 的一边轻轻接触到载玻片染液的边缘。此时再慢慢地放下盖玻片，这样可以避免 出现气泡。如载玻片上水过多，可用一吸水纸从盖玻片的一侧吸去过多的染液。 此时，可放在显微镜下进行观察。
在电镜下，叶绿体和线粒体一样，也显示为一个复杂的膜系统，对照电镜照 片你能说出叶绿体的超微结构吗？ （四）细胞内含物
1．多糖：观察小鼠肝细胞的永久制片，肝细胞内储存有大量的肝糖，可以用 PAS 反应显示肝糖在细胞内存在的部位。
2．脂滴：取花生的子叶，用徒手切片法，切成薄片，放于载玻片上，加一滴 苏丹 3 染液染色 5 分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖玻片，即可进行观察，观察时 注意脂滴的颜色及其在细胞内的分布。
按上述方法继续观察其他标本。 （2）小鼠肾细胞：肾小管细胞为方形，在细胞核周围被染成蓝黑色的是线粒体， 仔细观察它们是什么形状？ （3）小鼠肠细胞：细胞呈长柱状，注意线粒体形状及在细胞内的分布？
2．活体染色标本的制作与观察 （1）活体染色所用染色剂的一般要求
染料浓度：一般是非常稀的，詹纳斯绿作为活体染液，它的使用浓度范围在 1/3000—1/10000，也有人用 1/30000 浓度。使用浓度要依不同材料而异，如对 植物细胞线粒体的活体染色，可用 1%，配制时可用等渗盐水，如生理盐水或 Ringer 液。
2．高尔基体电镜照片的观察 在观察了光学显微镜下的高尔基体后，在观察示范电镜照片，注意高尔基体
是由几部分组成的。 （三）叶绿体
叶绿体—示范：叶片横切面上，在叶肉细胞质部位有许多圆形颗粒，此即叶 绿体。
此种材料，亦可取新鲜叶片，用刀片做徒手切片或用镊子撕下菠菜叶肉细胞 将切片放于载玻片上，滴一滴蒸馏水，加上盖玻片，即可在显微镜下直接观察绿 色的叶绿体。
观察制版标本时，要注意线粒体在不同细胞内的心态及在细胞质内的分布部 位。
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（1）兔肝细胞：先在低倍镜下找到标本，再换高倍镜观察，肝细胞为多角形的 较大细胞，细胞中央有一圆形细胞核，此时换上油镜头，再继续观察，注意在肝 细胞只能感线粒体是什么形状？它们在细胞质内是怎样分布的？
化学与生物工程系：
细胞生物学 实验指导
专 业 ：生 物 技 术 指导老师：陈 春 岚
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实验一 细胞和细胞内含物的观察
细胞质内含有多种细胞器。有些细胞器如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶 体等普遍存在于各种细胞中，而另有些细胞器如叶绿体，只存在于植物细胞中。 细胞质内的这些结构，除叶绿体外，一般在光学显微镜下不易看见，必须经过一 定的固定染色方法处理后，才能看到大多数细胞器，或直接用相差显微镜观察。
一、目的与要求
了解 Feulgen 反应的基本原理，学习其操作方法和压片法，初步掌握细胞分 裂各期的主要特点。 二、原理
Feulgen 反应的原理是根据 DNA 经弱酸（1mol/L）水解后，打开料嘌呤和脱 氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基就在原位与 Schiff 试剂结合，形成含醌基的化合物。Schiff 试剂是由碱性品红和偏重亚硫 酸钠作用形成的无色品红液，当无色品红液与醛基结合则形成紫红色的化合物。 醛基是一个发色团所以具有颜色，因此凡有 DNA 的部位，就呈现紫红色。材料不 经过水解或预先用热的三氯乙酸或 DNA 处理，得到的反应是阴性的，从而证明 Feulgen 反应的专一性。 三、实验内容
本实验所用标本是按 Aoyama 镀银法制作的，简单地讲。在制作中，首先将 材料放于含有氯化（）和福尔马林的固定剂中，进行固定，然后镀银，若干小时 后，取出放入还原液。最后，经脱水、包埋、切片，制成薄切标本。用这种方法 制成的标本，在细胞内的高尔基体被显示为棕黑色（详细方法见本实验末附录）。
1．高尔基体永久制片的观察。在兔神经节细胞核的周围原生质中，可看到棕 黑色的网状物，此即为高尔基体。
3、试剂：
（1）1mol/L 盐酸的配制：取 82.5ml 密度 1.19/ml 的浓盐酸加蒸馏水至 1000ml。
（2）Schiff 试剂的配制与保存：称取 0.5g 碱性品红加入到 100ml 株沸的蒸
馏水中，时时震荡，煮 5 分钟（不能沸腾），使之充分溶解。冷却至 50℃时用滤
线粒体 线粒体是一种动态的易变结构。经过处理在光学显微镜下呈现为颗粒状、棒 状或弯曲细线。线粒体的形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发 生变化，例如肝细胞、胰细胞的线粒体通常呈线状，成熟的卵细胞内线粒体呈颗 粒状，肾细胞内的线粒体呈棒状。显示线粒体的方法可以概括为以下几种： 1、生活细胞的观察。如将组织培养细胞或其他生活细胞，放在相差显微镜 下，就可以看到细胞质内有线状小体活动，这就是线粒体。 2、活细胞染色法。就是利用某些无毒或毒性较小的染料，显示出细胞内某 些特殊结构存在的真实性，而并不对细胞的活动有影响，如 Janus green B（詹 纳斯绿 B），就是一种毒性较小的碱性染料。将其配制成一定浓度，对活细胞进 行染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体，这就是线粒体。 还可看到其在细胞质内的活动状况。线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体 中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的 细胞质中的染料被还原呈无色。 3、固定染色法（即永久制片法）。用特殊的固定液染色处理动物的组织或细 胞后，可显示出线粒体的形态。但所用材料必须新鲜，否则线粒体常因已经破坏 而显示不出，线粒体的组成成分主要是脂蛋白，脂类又以磷脂为主，用于线粒体 的固定液含有饿酸，重铬酸钾等。因为两者均能使脂类物质保存下来，故可显示 出线粒体的形态。用于显示线粒体形态的固定、染色方法较多，常用的有 Altmann 染色法、Regand 染色法及 Chmpy-Kull 染色法等，但欲显示线粒体的细微结构， 则要用电镜技术。 4、生化分离提取方法。在一定的低温条件下，将组织细胞破碎制备成匀浆， 用于线粒体组分及其在不同生理状态的分离分析研究。