药品中有关物质分析方法验证
溶液配制
溶液1:空白辅料溶液
溶液2:在产品处方空白辅料中加入适量杂质对照品溶液,倍比稀释至目标浓度。
可接受标准
LOD: 按照检验SOP处理后进样空白辅料溶液,记录色谱图,计算平均噪音;连续10次进样处理后的检测限浓度溶液,记录色谱图;S/N要求:≥3;RSD%要求: 20% ;
LOQ:按照检验SOP处理后进样空白辅料溶液,记录色谱图,计算平均噪音;连续10次进样处理后的定量限浓度溶液,记录色谱图;S/N要求:≥10;RSD%要求: 20% ; 平均回收率80-120%;
溶液配制
在产品处方空白基质中加入适量对照品分别制备4X3样品(定量限,50%,100%,150%限度浓度),每个浓度制备3份溶液,按照SOP处理后进样,记录色谱图。
定量限≤忽略限(或报告限)
其它要求:拖尾因子(T) 理论塔板数(N) 分离度( R) 容量因子.
4.线性及范围
定义
线性系指在设计的范围内,测定响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度。范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。
溶液配制
在产品处方空白基质中加入分别加入适量杂质对照品溶液制备不少于5个浓度, 包括,空白基质,定量限,25%, 50%, 100%和150% 限度浓度;按照SOP处理样品,每个浓度进样2次。
各破坏溶液中新增降解杂质与主峰及已知单杂R≥1.5;
(可调整,至少保留主峰与相邻杂质R的标准)
各破坏溶液中主峰的纯度因子≥990;
2.系统适用性(在其他项目的验证过程中应考虑是否先符合系统适用性)
定义
系统适用性是为了评价色谱系统处在一种正常的工作状态的一种评价方式。一般来说由少量的几个参数进行评估,例如理论塔板数、拖尾因子、分离度等参数。
溶液配制
杂质对照品溶液,重复进样10次,记录色谱图。
可接受标准
要求:拖尾因子(T)理论塔板数(N)分离度( R) 容量因子符合要求;
重复进样保留时间的RSD符合要求;
重复进样峰面积RSD不大于10%。
(或符合专论中的系统适用性要求)
3.检测限及定量限
定义
检测限定义为样品中被分析物能够检出但无需准确定量的最低量。定量限(LOQ)定义为能够以适当的精密度和准确度对样品中的被分析物进行定量测定的最低量。
可接受标准
要求:测定结果间RSD不大于10%;
报告RSD置信区间(0.95)
2组数据:RSD不大于10%;
报告RSD置信区间(0.95)
重现性下进样序列
溶液名称
进样针数
空白溶液
1针或2针
系统适应性溶液
根据专论确定
对照液
3/5/6针(根据RSD定)
供试液6份
各1针
样品中待测成分的含量与精密度可接受范围(2020药典)
可接受标准
报告线形图,线性公式;R2应不低于 0.990;
│截距│%应低于 10%;报告残差平方和;
5.精密度(对方法n次重复,不是对某个溶液n次重复)
定义
精密度为在相同分析条件下的一组测量值相互接近的程度。ICH定义精密度含有3个部分,即重复性(repeatability)组间精密度(intermediate precision)和重现性(reproducibility)
验证结果/报告
—
方案实施中应从以下几个方面进行:
1.专属性 (专属性的研究一般优先于其它验证项目,为方法首要的属性)
定义
专属性定义为当预料到一些组分可能存在时,准确无误地检测被分析物的能力。
Байду номын сангаас空白干扰实验
溶液配制
空白溶剂溶液
空白辅料溶液
样品溶液
API溶液
对照品溶液
样品+对照品溶液
可接受标准
对照品溶液与供试品溶液、空白加样中目标杂质的保留时间(Rt)应一致;
待测成分含量
待测成分质量分数
重复性(RSD:%)
重现性(RSD:%)
(%)
(ppm或ppb)
(㎎/g或ug/g)
(g/g)
100
1000㎎/g
1.0
1
2
10
100000ppm
100㎎/g
0.1
1.5
3
1
10000ppm
10㎎/g
0.01
2
4
0.1
1000ppm
1㎎/g
0.001
3
6
0.01
100ppm
确认验证方案已经过相关人员批准
相关文件
与方法验证的工作相关的文件均为最新版本,且已获批准。
设备确认
设备是否符合要求 是否经过校准或检定
试剂、试液、标准品确认
试剂、试液是否在有效期内
验证实施
包括验证参数,可接受标准,验证的具体实施办法等
测试记录
验证过程中的记录,图谱等均应包含在验证方案中
偏差报告
验证中若发生偏差,偏差应被记录
未破坏供试液;
各破坏试验空白溶液;
酸破坏试验;
碱破坏试验;
氧化破坏试验;
关照破坏试验;
高温破坏试验。
注释:1.ICH 01B要求光强度总量要达到1.2×106Lux hours
2.破坏后主峰含量的计算:用未破坏供试液为对照液进行外标计算破坏后主峰含量,降解率在5-10%,降解率与总杂偏差≤5%
可接受标准
100ug/g
0.0001
4
8
0.001
10ppm
10ug/g
0.00001
6
11
0.0001
1ppm
1ug/g
0.000001
8
16
10ppb
0.01ug/g
0.00000001
15
32
6.准确度
定义
确度定义为测定值与真实值或认可的参考值之间接近的程度。准确度也可以定义为方法的测定值与真实值接近的程度。
药品中有关物质分析方法验证
一份完整的验证方案应包含以下几部分内容:
内容
备注
封皮
方案号,版本号
签批
也可以设计在封皮上
验证目的和概述
主要描述此次验证的目的和一些基本情况,是首次验证还是周期性验证
职责
规定不同人员在此次验证中的职责
人员/培训确认
确认方案实施人经过有效的培训,且培训合格,有相应的培训记录
方案批准
重复性
溶液配制
对照液,1份;
供试液或100%加标液或杂质限度的主成分考察溶液,6份
可接受标准
RSD(n=6)见下表
重现性
溶液配制
同重复性
可接受标准
RSD(n=6)≤见下表
RSD(n=12)≤见下表
重复性与重现性已知单杂含量均值(或主成分则以主峰计)的绝对差值≤0.05%(可调整)
中间精密度
溶液配制
不同的时间,使用不同的分析员、色谱柱和仪器,使用同批产品,重复<Repeatability>的测试,比较两组数据
空白溶剂、辅料及API对杂质测定无干扰(不大于积分阈值);
滤膜滤过后的空白辅料溶液,样品溶液,加标溶液,对照品溶液与过滤前峰面积的RSD符合SST要求,杂质峰个数不得增加,杂质个数及保留时间应一致。
不同弃去体积后所得色谱图符合上述要求;
各个色谱图中Rs≥1.5, 峰的纯度检测符合要求。
强制降解试验
溶液配制