医院检验中心VCS白细胞五项分类原理、技术特点和应用
问题
VCS原理和技术特点
在一个流式通道内,对单个白细胞进行直接、同时、三重测量,然后再进行三维分析。
1.Scatterpak试剂保证”接近原态”分析,避免化学方法对细胞
特性的破坏
Scatterpak(Erythrolyse—低渗、低pH、具表面活化性)
(Stabilyse—高渗、高pH)
WBC EL 肿胀ST:恢复等渗、生理pH 接近原态
RBC----------------- 肿胀---------------------------------------去除debris-------流式通道
PLT 肿胀El的表面活化作用继续发挥去除debris
(28μL) (300μL×2) (133μL)
2.流体动力聚焦细胞,令其在流式通道内作最适的单细胞排
列
ISOTON III作为鞘流
3.VCS检测-视角与手工相似
VCS技术检测细胞的角度与镜检血片相似,都是从体积、核质比、颗粒特性、膜特性和形态等方面观察。
但检测工具的敏感度大大提高,描绘程度上更精细,细胞的状态比染色情况下的更自然。
Volume
◆运用低频电流准确分析细胞体积
体积是区分白细胞亚群一个很重要的参数,它能有效区分LY和MO。
但仍然存在一定程度的混淆,如:LY和BA(φ同在9-12μm范围);不成熟LY和NE(φ同在12-14μm范围) ◆该技术1967年开始使用
◆库尔特专利
Conductivity-Opacity
◆运用高频电磁探针检测细胞内含物(细胞核、颗粒和其他
化学组份)的特性。
细胞膜对高频电流具传导性,当电流通过细胞时,细胞核、颗粒和细胞内的化学组份令电流的传导产生变化,其变化量(RF)可以用来反映细胞内含物的信息
◆RF=f(细胞体积,细胞内含物传导性)
◆Opacity(阻光性)是指将细胞体积对RF的影响去除后的高
频传导数据,可以更确切地描述细胞内含物
Opacity≅RF/DC
◆该参数可用来进一步区别体积差不多的细胞,如:LY和
BA(φ同在9-12μm范围),由于它们的核质比不同而在C参数上有所区别
◆库尔特先生在60年代着手研究该项技术,1970年获美国专
利
Light Scatter-RLS
◆运用一个氦氖激光源发出的单色激光扫描细胞,收集细胞
多角度(20-70度)的散射光(MALS),提供关于细胞形态,膜结构和颗粒性的信息
◆MALS=f(细胞体积、细胞膜结构和颗粒性)
Rotated Light Scatter=Log(LS)/DC,减少细胞体积的影响◆S在根据细胞的颗粒类型和颗粒数量区分细胞时十分有
用,VCS最成功之处在于它对EO的识别能力和计数
其它五分类仪器对EO的分辨往往不够成功或精度不高,因为很难将它与其它粒细胞区分完全
◆库尔特先生对流式光感应系统的研究可以追溯到20多年
前的Fulwyler前辈时代,同时库尔特公司在流式细胞仪的制作过程中积累了丰富的激光技术经验。
4.三维分析
◆根据每个细胞的V、C、S检测量,将她们分布到一个三维
坐标(256×256×256=16,777,216)上,用数学公式计算出各白细胞亚群的分布区,其分辨率是至今为止最高的
◆高分辨率不仅令五项分类清晰,还令异常得以敏感特异的
显示,原始细胞可以进一步区分是淋巴区、单核区、还是粒细胞区
◆高分辨率提供科研潜力
5.VCS统计量达到8000个细胞,保证一定的精度
6.VCS分类与手工分类的相关系数:LY>0.9; NE>0.9; MO>0.7
7.流式通道有进一步发展的潜力
◆MAXM:RET%
◆STKS:RET%、CD4、CD8
8.清晰的白细胞分布图
◆在仪器屏幕和打印报告上,我们可以看到三维座标有代表
性的三个侧面:
DF1-V和S座标面,可观察到LY、NE、EO和MO 4个细胞亚群
DF2-V和C座标面,可观察到LY、MO和颗粒细胞
DF3-V和C座标面,是DF-2去除NE和EO后的画面,可观察到LY、MO和BA细胞
◆另外还有一个汇总了V、C、S三种技术的直方图,可协助
进行数据判断
◆点分布图上用各种颜色代表不同细胞浓度:
黄>红>绿>蓝。