＜1
2/4只碟
即：1只碟长菌， 菌落数有2
2/4只碟
即：所有碟中菌 落总数为3,单个 碟中有3
2/3只碟
即：所有碟中菌落 总数有2,单个碟中 有2
2/4只碟
即：2只碟长菌， 单个碟中有1
1/2只碟
即：所有碟中菌落 总数有1
1/4只碟
1/4只碟
1/3只碟
1/4只碟
即：2只碟长菌， 即：所有碟中菌 即：所有碟中菌落 即：所有碟中菌
检测频率
洁净 级别 Class A
Class B Class C
浮游菌（静态）
沉降菌 动态 静态
每周第一批生产前和最 生产操
后一批生产结束
作过程 —
停产期间（HVAC系统
运行）每周一次
每周一次 每月一次
—
生产操 作过程
—
每月一次
手套5指样、衣服 (额头、前胸、肘、 膝盖部)
表面菌
每次出A级时 (每位人员）
设备环境表面菌的检测
措施 鉴别微生物。 调查 -是否存在的取样/检验程序的偏差。 -操作过程中环境系统，生产工艺是否存在偏差。 -评估结果趋势。 -根据现行程序对相关区域再清洁消毒 -按程序通知有关部门。 -在开始生产前复测。. -人员培训。 当有≥2次超过行动限时采取以下措施；
设备环境表面菌的检测
设备环境表面菌的检测
警戒限和行动限 警戒限：用来指示环境中的微生物数是否有偏离正常水平的可能性。 结果超出警戒限应采取的措施. -鉴别微生物 -调查 是否存在的取样/检验程序的偏差。 分析操作过程中环境系统，生产工艺是否存在的偏差。 -评估结果趋势。 -相关区域再消毒清洁。
设备环境表面菌的检测
行动限：环境中的微生物数超过此限度。 测试同一个房间不同点的微生物数连续三次超过警戒线； 表示环境中的微生物数污染水平已严重偏离正常水平， 并且对产品质量造成高度的污染风险。
50/2只碟 即：单只碟有50
—
25
—
—
—
100
50
即：单只碟有25
—
—
Class 合格限
200
100
50
50
—
D
行动限
100/2只碟即：单 5/2只碟
—
只碟有
即：2只碟长菌，单只
—
—
碟有5
警戒限
60/2只碟即：单
—
只碟有60
—
—
—
注：1、单个沉降碟摆放时间可小于4小时； 2、若动态检测浮游菌，A级浮游菌行动限为：3/4只碟，即1只碟长菌，菌落数有3； 警戒限为：2/4只碟，即2只碟长菌，每只碟中菌落数有2。
报告书 检测结束，由QC及时出具检验报告书。报告书一式二份， 一份附在检验原始记录中，一份发给车间。
检验原始记录由质量保证部存档。
附件: - 微生物检测记录 - 洁净区（室）微生物检测报告 - 生产区沉降菌采样位置示意图 - 浮游菌采样位置示意图 - 环境表面菌采样位置示意图 - 生产洁净区微生物监测标准操作程序培训记录
设备环境表面菌的检测
检测时间 方法
设备
换班清场前 用接触碟对主要生产操作设备表面、地面和墙面进 行取样，取样后，立即对取样位置用消毒液擦拭。 表面擦拭样为操作时人员易接触位置，如反应釜釜 体、抽滤器外表面、烘箱门把手等部位。
设备环境表面菌的检测
程序 检测仪器和平皿进出A/B级程序 通过物净 脱去外包装，用75%乙醇溶液擦试仪器外壁。 置物料暂存架上放置10分钟。 检测人员更衣后进入C级区，将仪器拿到C级区指定房间，用75% 乙醇溶液擦试仪器外壁。 将仪器放入传递窗，打开紫外灯照射20分钟。 样品的培养 先在20~25℃条件下培养72小时，然后在30~35℃条件下培养48小时。
生产洁净区微生物监测
程序 监测项目及频率 检测标准
洁净级别
Class A
合格限 行动限
警戒限
Class B
合格限 行动限
警戒限
洁净级别浮游菌 （cfu·m-3）
＜1
检测标准
沉降菌
接触碟 (φ55mm,cfu /25cm2）
(φ90mm,cfu /4h）
设备、墙面、地面 工作服
＜1
＜1
＜1
手套5指样（cfu / 手套）
浮游菌检测
准备及检测程序 培养皿 直径为90mm，培养皿的有效期为14天。 培养基 TSA（胰酪大豆琼脂） 检测程序 按仪器说明书规定程序进行操作 注意事项 如：使用MAS-100Ex（狭缝式采样器） 仪器经消毒后先不放入培养基平皿，开动仪器使真空泵抽气， 使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min。 每个点采集结束后，都需要将多孔罩用消毒剂擦拭，等消毒 剂蒸发之后再检测下个点。
一天二次，换班清洁前
(每一房间设备、墙、地 面各一个点) ；桌子和2 个水平层流每4小时一 次
— —
墙面、地面每班一次
—
Class D —
—
每月一次 —
—
生产洁净区微生物监测
测试时间 在净化空气系统正常运行不少于10min后开始。 测试状态 静态测试时测试人员不得多于2人。
沉降菌的检测
准备 培养皿的直径为90mm，培养皿的有效期为14天 培养基 TSA（胰酪大豆琼脂） 静态检测 由质量保证部QA人员将已制备好的培养皿，放置在
表面菌检测
接触碟与五指手套 准备 培养皿 直径为55mm的凸碟，培养皿的有效期为14天。 培养基 TSA （胰酪大豆琼脂）
人员表面菌检测
操作人员出A级区前，在规定房间进行取样。 取样程序：先分别取2只手套五指样，再分别取额头、前胸、手 肘和膝盖样。 打开接触碟盖子，将五指轻轻按于接触碟培养基上10秒钟后， 盖回上盖，做上标识。 再用接触碟分别轻压洁净服额头部、前胸部、手肘部(任一边)、 膝盖部(任一边)10秒钟后，盖回上盖，做上标识，标明操作人 员代号、取样位置及取样时间。
主要操作区内并接近于操作高度，打开培养皿盖， 将盖子倒扣放置，使培养基表面暴露4h，交QC培养。 C级，D级区域每个房间放置2个点。
沉降菌的检测
动态检测 将已制备好的培养皿放在接近于操作点位置，打开培 养皿盖，将盖子倒扣放置，沉降时间为操作全过程， 可以不足4h；若生产操作超过4h，需要更换新的培养 皿。 A级区域每个房间4个点，根据操作人员活动频率和物 料暴露风险影响放置，
确定 可能污染微生物的原因 调查 - 样品是独立的还是涉及整个区域 -人员 操作人员状态（级别），培训水平，健康，技术， 清洁程序（洗手、洗脸等） - 更衣程序 - 房间/洁净空气装置的HEPA过滤器完整性 - 已进行的过程 - 趋势图中的以前的检测结果或其他已确定的问题
设备环境表面菌的检测
调查范围 - 无菌生产人员 - 微生物检查人员 - QA/QC人员
谢 谢
生产洁净区微生物监测操作程序 杜平华
生产洁净区微生物监测
目的 建立该程序的目的是为了保证洁净区空气，无菌区设备表面和工 作人员微生物质量。 适用范围 A级、B级、C级、D级生产区微生物污染的控制和监测。
生产洁净区微生物监测
职责 QA负责静态沉降菌、浮游菌的取样。 QC负责按SOP要求提供微生物监测所需平皿、核对采样 后的平皿数，按要求培养，并及时出具监测报告。 操作人员负责动态沉降菌和表面菌的取样。
—
每只碟中菌落数 落总数为2，单个 总数1
落总数有1
有1
碟中有2
10
5
5
5
—
10/2只碟
5/2只碟
即：2只碟长
—
即：2只碟长菌，
—
—
菌，单只碟有10
单只碟有5
5/2只碟
3/2只碟
即：2只碟长
—
即：2只碟长菌，
—
—
菌，单只碟有5
单只碟有3
检测标准
Class 合格限
100
50
25
C
行动限 100/2只碟 即：单只碟