被检红细胞



标本新鲜 细菌污染的红细胞上T抗原激 活，与标准血清中抗T抗体结合，发生凝 集 某些疾病如多发性骨髓瘤、慢性肝病患 者所致的高球蛋白血症可能使红细胞出 现凝集 标本无溶血
Rh血型鉴定
Rh血型仅次于ABO血型系统。Rh抗原有 45种，与人类最密切的为D、E、C、c、 e，抗原强弱依次为D、E、C、c、e
凝聚胺(Polybrene)配血方法
患 者 主 侧 献 血 者 次 侧

室温放置 1 分钟
主次侧均 加凝聚胺、低 离子溶液
凝聚胺(Polybrene)配血方法
阳 性 离 心 主次侧均 加重悬液 看结果
凝聚胺引起 红细胞非特 异性凝集
阴 性
微柱凝胶介质配血法

当凝胶中含有抗球蛋白时就相当于抗球 蛋白配血，不含有时就相当于盐水介质 配血法。
故细胞膜上有D抗原者为阳性，无为阴性。 其抗体多为IgG抗体。
Reaction of antibodies
血型血清学检测的基本原理
凝聚胺实验

凝聚胺是带高价阳离子的季铵盐，溶解 后产生正电荷中和红细胞表面的负电荷， 减少红细胞表面的排斥力，有利于红细 胞凝集。
酶介质法

红细胞表面的唾液酸带负电荷，使用木 瓜酶或唾液酶破坏红细胞表面的唾液酸， 降低红细胞表面的负电荷，减少红细胞 表面的排斥力，促进Rh抗原与相应的抗 体结合而产生凝集。
ABO血型鉴定实验原理


抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红 细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗 体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗 体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→ 从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B 抗原→判断血型。 时间长 凝集较弱时易导致定型错误
实验原理
含某种凝 集原的红 细胞 含相应凝 集素的血 清
血型抗原
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原 其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
原理

根据红细胞膜上有无A抗原或B抗 原，将血型分为A型、B型、AB型 及O型四种。通常利用红细胞凝集 试验，通过正定型和反定型鉴定 ABO血型。
血型鉴定


正定型是用已知抗A和抗B分型血清 来测定红细胞上有无相应的A抗原或 B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测 定血清中有无相应的抗A或抗B。
质量控制
人血清ABO血型抗体

高度特异性


效价 抗A不低于1:128 抗B不低于1:64 高亲和性 15秒内出现凝集，3min凝块 >1mm2 无冷凝集素 无菌
人ABO血型单克隆抗体


特异性 亲和性 抗A对A1/A2/A2B出现凝集时 间分别为15秒、30秒、45秒，抗B出现 时间为15秒 效价 抗A1和抗B均为1:128 灭活补体 否则可能发生溶血，影响血 性判断
凝 集
不 凝 集
交叉配血试验方法


盐水介质配血
酶介质配血

菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法

抗球蛋白介质配血



聚凝胺介质配血
凝胶方法配血
盐水介质配血方法
患 者 主 侧
献 血 者 侧 阳 性
离心 次 看结果
阴 性
只能检测IgM抗体，不能检测IgG抗体
凝聚胺(Polybrene)配血法
2.试管法(正定型)




A标准血清 B标准血清 2滴 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 取出观察结果:
A 2滴
B


完全凝集:管底部有红细胞的凝块，管底细胞 边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散； 完全不凝:血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐， 用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升， 随即成为均匀的悬液； 轻微凝集:必须将液体转到载玻片上镜检后判 定凝集程度。
试管法(反定型)



受检者血清 2滴 5%的A型红细胞悬液 1滴 5%的B型红细胞悬液 1滴 立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心 15秒。 轻轻扣动试管底部，观察结果----同前 时间短 可发现较弱凝集
Ac 2滴
Bc 2滴
血型判定
正定型 抗A 抗B
A型RBC
反定型
B型RBC O型RBC
结果
+ -
+
+
+
+
+ -
-
O
A B
+
+
-
-
-
AB
凝胶微柱法

利用凝胶分子筛作用和亲和效应，以凝 胶微柱为反应介质，在凝胶介质中红细 胞与相应抗体结合，形成红细胞凝块， 经低速离心，凝集红细胞悬浮在凝胶中， 未结合红细胞沉于底部。根据不同需要， 采用中性凝胶、特异性凝胶、抗球蛋白 凝胶。灵敏度高、特异性强、重复性好， 易于保存
低离子强度溶液实验

红细胞外围的阴离子是红细胞稳定因素 之一，降低反应介质的离子强度，可减 少外围阴离子，促进带正电荷的IgG性 Rh抗体与红细胞发生凝集反应，从而增 加凝集强度。
抗球蛋白试验

不完全抗体多于相应红细胞结合，在盐 水介质中不出现凝集，利用抗球蛋白抗 体作为第二抗体，链接致敏红细胞表面 的特异性抗体，使致敏红细胞出现特异 性凝集。
红细胞血型系统交叉配血试验
交叉配血试验的内容
患 者
主侧配血
主 侧
次 侧
用患者血清与供 者红细胞进行试验
次测配血
供血者血清与患 者红细胞进行试验
献 血 者
交叉配血的要求


主侧配血要求： 绝对不可以有凝集或溶 血现象。 次测配血要求： 供血者血清加受血者红 细胞在允许范围内，可 以有凝集现象，但不可 以有溶血。

原理：凝聚胺分子是带高价阳离子多聚
季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中 和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝 聚，低离子强度溶液也能降低红细胞的 Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的 吸引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与 红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐 解聚液以消除聚凝胺的正电荷，使IgM或 IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体， 加入解聚液可使非特异性凝集消失。
二、操作
1、取12×75mm干净小试管1支
2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴
3、滴入红细胞悬液
4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性

1、原理 血型抗体与对应红细胞抗
原在室温下的盐水介质中出现凝集 反应。通过离心，观察受血者血清 与供血者红细胞(主侧)以及受血者 红细胞与供血者血清(次侧)之间有 无凝集现象，判断受血者与供血者 之间有无ABO血型不合的情况。
血型不相容的红细胞凝集反应 (agglutination)


观察结果 如有凝集反应可见到呈红色点 状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有 无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低 倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见 红细胞聚集成团。 判断血型 根据被试者红细胞是否被A， B型标准血清所凝集，判断其血型。