• 不要将标本置于福尔马林中
• 无菌纱布用灭菌的且不含抑菌剂的盐水润湿，将标本置于该纱布上，放 在无菌容器中，保持组织湿润
• 革兰染色涂片是所有厌氧培养的标准
Johns Hopkins specimen collection guideline 2013, CID 2013:57(4)
外科组织标本研磨处理
血液标本
• 1．标本采集注意事项：
• • • • （1）采血时间 ： 最佳采血时间清晨 采血前病人禁食12h（受饮食影响的项目） 采血尽可能安排在其他检查和治疗前进行。
• 特殊时间 • 药物：药物监测室要根据药物浓度峰值期和标定期采血，要注明采血 时间。地高辛药物浓度6-8h，输脂肪乳（尽可能在用药后4h后） • 高血压四项:先抽卧位，需平躺两小时后采血，后直立行走或靠墙站立 1-2小时后采立位标本。每个标本需要采集2管抗凝血（紫帽管各 2ml），共4管。病房患者也可早上醒来先采卧位，活动一小时后再采 立位。 • 血清促肾上腺皮质激素（ACTH）: (8点、16点、0点) • 糖耐量检测 、胰岛素测定、C-肽测定：橘红帽管2ml（根据不同时间 要求采集）（如：空腹、半、1、2、3小时）。
不同抗凝比例的血凝测定结果（X±s）
抗凝剂：血液 1:9 1:7 1:6 1:5 1:4 1:3
PT(S)
12.9±0.7 13.3±0.7* 14.3±0.9# 16.1±1.2# 23.8±2.1# 38.6±3.8#
PT-INR
1.08±0.10 1.11±0.11* 1.19±0.14# 1.34±0.15# 1.98±0.19# 3.22±0.37#
Johns Hopkins specimen collection guideline 2013
脑脊液的采集
尽可能在抗菌药物使用前采集 首瓶标本由于极易被皮肤定植菌污染，不应送往实验室做直接涂 片、培养和分子研究 标本置于无菌防漏管内，共采集3瓶。对疑似细菌性脑膜炎的患者， 应取2~4瓶脑脊液 如怀疑诺卡菌属、真菌或分枝杆菌等不常见细菌感染，应通知微 生物室做特殊操作 不要冷冻脑脊液标本
• 5．时间
• 病人准备还应考虑病人的生物钟规律，特别是激素水平 分析，如女性生殖激素与月经周期密切相关；胆固醇则 在经前期最高，排卵时最低；纤维蛋白原在经前期最高， 血浆蛋白则在排卵时减少。生长激素于入睡后会出现短 时高峰。胆红素、血清铁以清晨最高；血浆蛋白在夜间 降低；血Ca往往在中午出现最低值。故采血时间应在相 同时间进行。
•
•
采样操作手法 • 1、有抗凝剂的试管，如紫红头、蓝头、黑头、 绿头试管，一定要注意采完血后要充分混匀， 以避免发生溶血。 • 充分混匀（颠倒5-6次）混匀手法不要过于剧烈 造成溶血，可导致细胞计数结果偏低。在末梢 血采集时，消毒剂未完全干燥之前进行穿刺可 能导致血细胞的破坏，引起计数结果偏低。 • 2、避免留置针放血，尽量不选择动脉。 • • • • 规范贴标签 1、沿管壁盖贴标签 2、条码靠上 3、沿试管标签贴保留是管空白
• (2) 采静脉血时止血带结扎过久，可引起误差。如以结扎1min的样品 结果为基数，则结扎3min，可使血浆总蛋白增加5％，胆固醇增加5 ％，铁增加6％，胆红素增加8％，乳酸则不能使用止血带。引起血 流淤带或血管受损可能引起组织因子进入血液，造成部分凝血因子 测定结果降低
• (3) 溶血：当溶血发生时，红细胞内容物进入血浆，引起血浆成分的改变，
血培养的污染很常见，消毒至关重要！
• 血培养瓶：瓶盖75%酒精消毒，自然干燥（~1min）切勿用棉棒擦干。 • 皮肤消毒三步骤： – 以采血点为中心，由内向外以75%酒精消毒，自然干燥（~1min） – 主要消毒剂由内向外涂抹皮肤 • 含碘制剂需要足够消毒时间（碘酊30s 、碘伏1.5~2m）、次氯 化物、葡萄糖洗必太（30s）优于聚维酮碘 – 75%酒精脱碘由内向外涂去碘液 儿童：参照成人 *新生儿及2个月内的婴幼儿： 75%酒精消毒
• •
2．饮食 多数试验要求在采血前禁食12h，因为饮食中的不同成分可直接 影响实验结果。
•
• •
(1) 餐后血液中TG、ALT、GLU、BUN、Na等均可升高，进食高蛋 白或高核酸食物，可以引起血中的尿素氮(BUN)和尿酸(UA)的增 高。进食高脂肪食物后采集的血液样本，其血清会出现浑浊， 可影响许多检验测定的正确性。。患者空腹时间过长（超过16h） 也会使血清白蛋白、补体、转铁蛋白、葡萄糖含量下降、而血 清胆红素因清除率减少而升高。 （2）食物如含有动物血液，可引起粪隐血假阳性。
问：采集血培养的时机是什么？ 答：尽可能在抗菌药物使用前采血 培养。
问：血培养每瓶采血量为多少？
答：成人：8-10ml，勿低于5ml，也不 要高于12ml。真菌培养请使用下图中左 侧的培养瓶，抽血量为5mL。否则会直 接影响阳性率。儿童：除外新生儿，不 建议只进行单套血标本的培养，新生儿 1～2套。血培养血量要求如下：
推荐采血顺序如下： ①血培养瓶，②凝血项目管（蓝帽），③血沉管（黑 帽），④血清管（红帽或黄帽），⑤肝素血浆管（绿 帽），⑥EDTA 管（紫帽），⑦ 抑制血糖酵解管（灰帽）
•
这是因为注射器中的血液注入血培养瓶时，由于空气轻，气泡会上升，此 时注射器上部的血液中存在气体的可能性大，应避免将其中的氧气引入厌 氧瓶。总之，无论采用何种采血方式，应最大限度的避免空气进入厌氧瓶 在实际工作中，如患者静脉条件较差，有可能采血不足，血培养优先考虑 需氧管，其它管应首先考虑凝血（蓝帽）和血沉（黑帽）检测管，因为这 两种标本对血量要求最严格，且二者抗凝剂均为枸橼酸钠。 注意：EDTA管（紫帽）绝对不能放在血清管前，因其中的钾可能对血清 管造成污染，使钾升高。凝血管先采是很有必要的，随着采血时间的延长， 凝血因子会发生变化。
主要内容
• • • •
一 血液标本的采集及质量控制 二 微生物标本的采集及质量控制 三、标本的保存和运输 四、常见不合格案例
一 血液标本的采集及质量控制
一、病人准备
• 1．病人状态 • 一般需在安静状态下采集标本，如患者处于高度紧张的 状态时，可使血红蛋白、白细胞增高。由于劳累或受冷 等刺激、也可见白细胞的增高。活动的影响可分暂时和 持续性两类。暂时性影响如使血浆脂肪酸含量减少；丙 氨酸、乳酸含量增高。持续性影响，如激烈运动后使CK、 LDH、ALT、AST和GLU等的测定值升高，有些恢复较慢， 如ALT在停止运动1h后测定，其值仍可偏高30％～50％。 因此，标本采集前绝对避免剧烈运动、上下楼梯、步行 过快等，或嘱患者休息30min以上方可采集。
对一些细胞内外浓度差较大的检测项目(如谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、钾)的 测定结果造成较大的影响。。
(4)抗凝比例不当，血量过少引起抗凝剂比例不当或
混匀不彻底使得抗凝剂不充分，导致凝血过程激 活和凝血因子的消耗。这种情况可能引起内源性 、外源性凝血时间的延长以及部分凝血因子测定 结果的偏低。 错误的抗凝剂如EDTA、肝素，尤其是肝素会造成 PT、APTT时间的延长；
APTT(s)
32.2±2.5 33.3±2.5* 36.5±3.1# 40.8±3.2# 58.2±5.3# 87.8±10.1#
TT(s)
16.9±1.0 17.4±1.0* 18.9±1.3# 22.3±1.3# 29.1±2.4# 46.1±5.6
Fib(g/L-1)
3.10±0.46 2.93±0.45* 2.78±0.38# 2.58±0.37# 2.26±0.35# 1.77±0.27#
• •
• 3．药物 • 药物对检验的影响非常复杂，在采样检查之前，以暂停各种药物为宜， 如某种药物不可停用，则应了解可能对检验结果产生的影响。庆大霉 素、氨芐青霉素可使谷丙转氨酶活性增高、咖啡因可使胆红素增加、 维生素C可使血糖、胆固醇、甘油三脂、尿酸严重降低。 • 4．体位 • 体位影响血液循环，由于血液和组织间液因体位不同而平衡改变，则 细胞成分和大分子物质的改变较为明显，例如由卧位改为站位，血浆 ALB、TP、酶、Ca、胆红素、Tch及TG等浓度增高；Hb、HCT、RBC等 亦可增加。由于体位的因素，在确立参考值时，应考虑门诊和住院病 人可能存在的结果差异，故采集标本时要注意保持正确的体位和保持 体位的一致性。 •
儿童血培养采集规范
左侧
右侧
新生 儿
8～ 13
13～ 27
27～36
Kg
Kg
Kg
>36 Kg
单抽1儿童
瓶： 0.5～1.5ml
单抽1儿童
瓶： 3～5ml
单抽2儿童
瓶: 5ml/瓶
单抽2成人
瓶: 8ml/瓶
双抽4瓶成人
瓶: 8-10ml/瓶
参考文献： Clinical Microbiology Procedures Handbook； ASM and IDSA guideline, CID, 2013
脓液的采集
• 注射器抽吸法 – 将5-10ml吸取物置于厌氧转运培养基立即送检 – AFB培养：将至少1ml抽吸物置于无菌容器中转运，厌氧转运培养基 不能用于AFB培养 – 当怀疑是厌氧菌感染时，可通知微生物室床旁接种。 • 拭子采集法 – 由于标本易干，切获得量有限，应避免使用拭子 – 不被接受的情况：分枝杆菌培养、肛周脓肿、口腔脓肿 – 非最佳选择的情况：• 尽可能在抗菌药物使用前采集
• 自然咳痰：晨痰，清水漱口清洁口腔。用力深 标本量>1ml
• 诱导痰：3%～10%无菌盐水25ml雾化吸入 • 采集后立即送至微生物室，并于1h内接种。
咳，
• 咳痰标本可用于细菌、分枝杆菌和真菌培养，不可 用于病毒培养。
组织标本的采集
• 应在无菌条件下采集标本，包括从病变及正常边缘采集 • 室温下1h内送达，采用厌氧转运容器，确保厌氧菌能复活增殖
检验医学分析前质量控制 及对策