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2.皂苷类化合物的检测方法
一、总皂苷的分光光度测定法 一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 注释
• (1)人参系五加科植物人参panax ginseng C A Meycr的根，含有多种人参皂苷 （ginsenoside），多数为达玛烷型皂苷，如人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、 Rd等，少数为齐墩果酸型（C型）皂苷、如人参皂苷Re，由于苷元不同，达玛烷型 皂苷又分为20S-原人参二醇类皂苷（A型）和20S-原人参三醇类皂苷（B型）。A型 和B型皂苷酸水解后，分别得到人参二醇（panaxadial）和人参三醇 （panaxatriol）。除人参外，五加科的西洋参、三七、刺人参、刺五加和葫芦科的 绞股蓝中亦含有与人参皂苷类似的化合物。当保健食品原料配方中含有上述多种原料 时，即以本法“总皂苷（以人参皂苷Re计）”报告检测结果。 （2）对于人参、西洋参、绞股蓝纯品或者以其为主要原料加工的保健食品，按《中 华人民共和国药典》，以薄层色谱法进行鉴定试验，将受试品色谱与对照药材色谱及 对照进行比较确定其主要原料后，人参、西洋参制品仍以人参皂苷Re为对照品进行 检测、而绞股蓝制品以绞股蓝总皂苷（中国药品生物制品鉴定所）为对照品进行检 测，分别以“人参总皂苷”、“西洋参总皂苷”报告检测结果。 （3）回收率：90%~105%。
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1. 多糖的检测方法
一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品处理
由于不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处 理，否则结果偏高。添加淀粉的样品需加α-淀粉酶及糖化 酶（如葡萄糖苷酶）处理。添加糊精的样品需加糖化酶 （如葡萄糖苷酶）处理。 处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解 成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分 离的目的。
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品处理 • 沉淀粗多糖
准确吸取样品提取中终滤液5.0ml或液体样品5.0ml，置 于50ml离心管中，加入无水乙醇20ml，混匀5min后，以 3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用80%(体积分数） 乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3-4次。 残渣用水溶解并定容至5.0ml，混匀后供沉淀葡聚糖。
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2.皂苷类化合物的检测方法
LOGO 皂苷类 保健功效成分来源与保健功能
功效成分 保健功能
缓解体力疲劳、 增强免疫力、 抗氧化、抗辐射、 提高缺氧耐受力、 辅助降血糖、 保护心血管系统
主要来源
红景天苷 人参皂苷
人参、西洋参、红景天、绞股蓝
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2.皂苷类化合物的检测方法
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1. 多糖的检测方法
三、硫酸软骨素的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 注释
硫酸软骨素是提取于动物软骨的黏多糖类物质，在 心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要作用。硫 酸软骨素除了作为药用品外，大量的是作为改善关节 病的补充品，作为健康食品应用，在美国已经风行多 年，经过多年的应用，已经证明硫酸软骨素对改善老 年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果。
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 注意事项
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本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残基 在测定过程中应避免糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚—硫酸与糖 和碳水化合物起反应 某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进行测定，但样 品预处理时将乙醇改为丙酮即可 洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物 用80%乙醇洗净，否则结果偏高 此法适用于测定高分子量的糖类物质（>10000Da）
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1. 多糖的检测方法
一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 注意事项
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测定样品中多糖时，提取时间以1小时为宜，以免因提取时间过长引起 糖结构变化甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低 本法灵敏度高，出现测定结果平行性偏差较大,实际操作时每个样品要 多做几个平行样 由于保健食品组方的复杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效 果是不同的 酶的活性对酶解的效果影响较大 粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖计或葡聚糖计，因两者测定值 相差很大
主要来源
灵芝、香菇、枸杞、银耳、 灰树花、人参、西洋参、 昆布、木耳、山药、黄芪、 茯苓、猪苓、黄精、苦瓜
硫酸软骨素
辅助降血脂 增强免疫力 保护骨关节 参与制造骨骼
动物的软骨
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1. 多糖的检测方法
一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 测定原理
- 多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干 扰，再与苯酚—硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶 液中的糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品处理
1）样品提取 2）沉淀粗多糖 3）沉淀葡聚糖
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品处理 • 样品提取
称取混合均匀的固体样品2.0g,置于100ml，加水80ml左 右，于沸水浴上加热2小时、冷却至室温后补加水至刻 度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖
分光光度法
测定保健食品功效成分
仓公敖
内 容
LOGO
1. 保健食品的原料与功效成分 2. 保健食品的功效成分与保健功能 3. 保健食品功效成分的检测 4. 检测方法的技术要求及数据处理
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1. 多糖的检测方法
LOGO 多 糖 保健功效成分来源与保健功能
功效成分 保健功能
缓解体力疲劳 灵芝多糖 香菇多糖 增强免疫力 辅助降血糖 辅助降血脂
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1. 多糖的检测方法
一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品测定
定量准确移取样品溶液于25mL比色管中，补加水至 2.0mL,加入5%苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心 加入浓硫酸10mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中 2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空 白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
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1. 多糖的检测方法
三、硫酸软骨素的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 测定原理
- 结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带正电荷，易与 带酸性基团的生物大分子发生静电作用而形成离子配合 物，已用于脱氧核糖核酸、干扰素等的分光光度法分析。 结晶紫结构中的氨基带正电荷，硫酸软骨素的磺酸基和羧 基带负电荷，两者通过静电引力和输水作用力形成络合 物，产生变色效应，吸光度降低。吸光度的降低量与硫酸 软骨素含量线性相关
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2.皂苷类化合物的检测方法
一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 一、总皂苷的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品测定
显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰 乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加入0.8mL高氯 酸，混匀后移入10mL比色管中，塞紧盖子，于60℃以下水 浴加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后 以1.0cm比色皿与560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。
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2.皂苷类化合物的检测方法
一、粗多糖的苯酚—硫酸分光光度测定法 一、总皂苷的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品处理
柱层析：以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取 上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗 去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱 总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作 显色用。
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品处理 • 沉淀葡聚糖
准确吸取沉淀粗多糖后的终溶液2ml，置于20ml离心管 中，加入100g/l氢氧化钠溶液2.0ml、铜试剂溶液2.0ml， 沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min,弃去上 清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反 复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0ml溶解 并转移至50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液 为样品测定液。
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 测定原理
- 食品中相对分子质量大于1*104的高分子物质在80%乙醇溶 液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜 试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的 多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含 量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计 算食品中粗多糖的含量。
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1. 多糖的检测方法
二、葡聚糖的分光光度测定法 LOGO 多 糖
• 样品测定
准确吸取样品测定液2.0mL，置于25mL比色管中，加入 50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫 酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷 却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参 比，1cm比色皿测定吸光度值。