先要
3. 将其构建在一个高效表达载体内。目前，一般 使用
4. 的载体有两类：一类是病毒载体，如牛痘病毒、 腺
5. 病毒、逆转录病毒和杆状病毒。另一类是质粒
载体
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二、生产用动物细胞的要求和获得
三、基因工程细胞的构建和筛选 2. 基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选
载体构建后，可用四种方法导入动物细胞，其 中最常用的是磷酸钙沉淀法和电穿孔法，各种常用 的方法见后表。
细胞分为：贴壁依赖型（贴壁细胞）和贴壁非依赖型
（悬浮细胞）。
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一、动物细胞的形态和生理特点
1. 贴壁细胞
2.
这类细胞的生长必须有给你贴附的支持物
表
3. 面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴 附
4. 因子才能在该表面上生长、增殖。当细胞在该 表
5. 面生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细
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二、生产用动物细胞的要求和获得
一、生产用动物细胞的获得 2. 二倍体细胞系
原代细胞经过传代、筛选、克隆，从而从多 种细胞成分的组织中挑选并纯化某种具有一定特 性的细胞株。该细胞株仍具备“正常”细胞的特
点 ：① 它的染色体组型仍是2n的核型；②具有明显 的贴壁依赖和接触抑制的特性；③ 只有有限的增 值能力，一般可连续传代培养50代；④ 无致瘤性
动物细胞相对于原核细胞，它们多半是分泌 在胞外的，收集纯化方便，得到了较完善的翻译 后修饰，特别是糖基化，因此更与天然的产品一 致，更适合于临床使用。
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二、生产用动物细胞的要求和获得
一、生产用动物细胞的获得
1. 原代细胞
2.
原代细胞是直接取自动物组织、器官，
经过
3. 粉碎、消化而获得的细胞悬液。
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点 5. 动物细胞对培养基的要求高
动物细胞对营养的要求高，不仅需要12种必 需氨基酸，还需要多种细胞因子和贴壁因子等才 能生长，这种要求还随细胞种类的不同而不同。
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点 6. 动物细胞蛋白质的合成和修饰功能与细菌不 7. 同
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点
1. 细胞的分裂周期长
2.
动物细胞分裂周期所需的时间一般为
12~48
3. h，它不仅随细胞种属的不同而不同，同一种
4. 属，不同部位的细胞所需的时间也不同。
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点 2. 细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象
干扰素。
SP2/0-Ag14：被广泛用于单克隆抗体杂交瘤细胞
的制备和抗体的生产，近年来正被开发为生产其
它药品的高表达宿主细胞。
Sf-9：目前被广泛用于高效表达外来的蛋白制品。
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二、生产用动物细胞的要求和获得
三、基因工程细胞的构建和筛选
1. 真核细胞基因表达载体的构建
2.
要将外源基因在动物细胞中高效表达，首
用于构建工程菌的是一株缺乏二氢叶酸还原酶的
营养缺陷突变株CHO-dhfr-。
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二、生产用动物细胞的要求和获得
二、常用生产用动物细胞的特性
BHK-2：二倍体细胞系。用于增值病毒和工程细
胞的构建。
Vero:贴壁依赖型的成纤维细胞。支持多种病毒的
增值，已被批准用于人体。
Namalwa:转化细胞系。被大规模地用于生物素α
当细胞在基质上分裂增殖，逐渐会合成片时 ，即每个细胞与其周期的细胞相互接触时。细胞 就停止繁殖。此时若能保持充足的营养，细胞仍 可存活相当一段时间。但细胞密度密度不再增加 ，所以该现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现 象。
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点
3. 正常二倍体细胞的生长寿命是有限的 当细胞离体培养开始，我们称之为原代培养。
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二、生产用动物细胞的要求和获得
二、常用生产用动物细胞的特性
WI-38：二倍体细胞系。该细胞是最早被认为是
安全的传代细胞。在20世纪60年代广泛用于制备
疫苗。
MRC-5:二倍体细胞系。被广泛用于人体疫苗的生
产。
CHO-KI:1957年从中国地鼠暖巢中分离的一株上
皮样细胞，培养时需要加入脯氨酸。当前被广泛
动物细胞比植物细胞的培养难度大得多，因 为动物细胞膜外没有细胞壁保护，仅有一层很薄 的粘多糖蛋白。因此动物细胞对渗透压、pH、离 子浓度、剪切力、微量元素等的变化耐受力很弱 。
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点 4. 动物细胞对周围环境十分敏感
动物细胞比植物细胞的培养难度大得多，因 为动物细胞膜外没有细胞壁保护，仅有一层很薄 的粘多糖蛋白。因此动物细胞对渗透压、pH、离 子浓度、剪切力、微量元素等的变化耐受力很弱 。
胞
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一、动物细胞的形态和生理特点
2. 悬浮细胞
这类细胞的生长不依赖支持物表面，可在培 养液中呈悬浮状态生长。
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一、动物细胞的形态和生理特点
3. 兼性贴壁细胞
这类细胞并不严格地依赖支持物表面生长， 一定条件下，它们还可以在培养基中呈悬浮状 态良好地生长。这类细胞称之为兼性贴壁细胞。
以后经传代后，即成为有限细胞系。细胞经若干
代传代培养后逐渐死亡，该时间的长短取决于细
胞来源的种族和年龄。当细胞经自然的或人为的
因素转化为异倍体后，该细胞即可转变为无限细
胞系，或称连续细胞系。此时细胞的寿命将是无
限的，因此更适合于工业化生产的需要。
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一、动物细胞的形态和生理特点
动物细胞的生理特点 4. 动物细胞对周围环境十分敏感
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二、生产用动物细胞的要求和获得
一、生产用动物细胞的获得 3. 转化细胞系
这类细胞是通过某个转化过程形成的，他常 常由于染色体的断裂变成了异倍体，从而失去了 正常细胞的特点，而获得了无限增值的能力。由 于转化的细胞具有无限生命力，而且常常倍增时 间较短，对培养条件和生长因子等要求较低，故 更适于大规模工业化生产的需要。
第三章 动理特点
动物细胞的结构较原核细胞复杂得多，而且以不
是靠一个细胞包办一切生理活动，各细胞都有明确的
分工。为了适应其功能需要，细胞的形态也有了相应
的变化，我们称这种变化为分化。如：红细胞呈圆盘
形；神经细胞呈纤维形。然而当细胞离体培养时这些
分化的形态经常会发生变化。我们通常将离体培养的