床旁CYP2C19基因检测与氯吡格雷个体化用药
Robert JD, et al. Lancet 2012;379:1705-11
Overall cohort
CYP2C19 wildtype Carriers of CYP2C19*2
基因导向的华法林个体化用药缩短达稳态剂量的时间
Pirmohamed M. et al. N Engl J Med 2013


标本拒收





无标签 标签不清晰 采血管破裂 已开盖 抗凝剂不符合要求（如肝素抗凝） 运送时间超过1周 肿瘤组织标本量或肿瘤细胞含量达 不到要求，未按要求预处理标本； 送检项目不清晰
标本的保存

血液标本：2～8℃保存（最长不超过72h），尽 量24h内提取DNA；
骨髓：立即提取DNA；RNA检测标本干冰送达， 采样后4h内提取RNA，或去除红细胞后冻存。 组织标本：DNA分析标本2~8℃放置不超过24h, -70℃或更低的温度可长期保存；RNA分析标本 采样后4h内提取RNA，或标本速冻后-70℃或更 低的温度长期保存；



石蜡包埋组织：DNA分析室温条件下可无限期放 置，不建议用作RNA分析。
分析中质量保证

实验室设计要求 仪器设备的使用、维护与保养 检测方法 人员培训
检测体系的性能验证
1. 实验室设计要求
测序间 芯片分析 质谱分析 ……
缓冲间
标准PCR实验室
2. 仪器设备的使用、维护与保养


步骤：PCR扩增、PCR产物纯化、测序反应、电 泳测序、结果分析； 优点：测序长度较长，可发现新的变异位点；
缺点：灵敏度不够高，出现假阴性；不易普及； 成本相对较高，通量低。
可待因

CYP2D6
去甲基可待因
吗啡
男，62岁，因肺炎住院 常规剂量的可待因镇咳 治疗期间昏迷（中枢神经系统受抑制）
血浆吗啡的浓度是预期的20倍
基因检测结果：CYP2D6超强代谢者
TPMT与6-MP代谢
SH N N N NH
6-MP
HGPRT
TIMP
代谢酶
TGN
DNA
TPMT
无毒代谢产物 解毒通路

3. 标本的运输与保存


明确样本收集、处理过程的条件要求；
防止管盖脱落、破碎、核酸降解的措施；
尽量短的时间内送达实验室；
选择可靠的快递公司；

交接需有签收记录。
标本类型与运输保存条件要求
标本类型 DNA检测 mRNA检测
全血标本 室温放置24h，或2-8C储存72h， 迅速冻存，或4h内提取 加干冰或冰袋运输。 RNA；干冰运输。

原则上按《个体化医学检测质量保证指南》 要求进行；

制定书面的、有案可查的预防性维护及校准 计划，建立仪器设备日常维护的SOP；
计量分析仪器：计量检定机构定期校验； 每台仪器应配备专用清洁工具； 保存仪器使用、维修、保养记录。

3. 核酸提取

生物安全柜内操作； DNA：酚-氯仿法、盐析法等提取， TE (pH 7.2)溶解，OD260/280 1.6~1.8，浓度大于50 ng/μL，原液70C或以下环境保存； RNA：异硫氰酸胍结合氯仿-酚提取法， 沉淀于无水乙醇中，-70C保存， OD260/280 1.8~2.1，琼脂糖电泳确 定RNA的完整性（28S:18S≥2）。
Mega JL, et al. N Engl J Med 2009
Delaney JT, Clin Pharmacol Ther 2012
SLCO1B1*5 多态性增加辛伐他汀所致肌病的发生风险
Link E, et al. N Engl J Med 2008; Voora D, et al. J Am Coll Cardiol 2009
送检单的填写与送检项目的复核

临床信息采集表：检测项目、标本编号、受检 者姓名、性别、出生日期、民族、采样日期、 标本类型、相关的临床资料、采样单位及科室 名称、送检医师姓名。
2. 标本的采集

全血：用于测定基因组多态性，最常用；
组织：新鲜组织、冰冻组织、石蜡包埋组织、 穿刺标本，用于检测体细胞突变、基因扩增、 融合基因、甲基化、mRNA表达水平； 口腔拭子：基因组多态性；
各国因严重药物不良反应引起住院及致死情况
就诊 死亡
美国 220万 10万以上
德国 50万 2.5万
中国 -19.2万
我国聋哑儿童100多万， 约50%为药物致聋。 有40余种药物因严重药害事件被美国FDA召回
遗传因素影响药物反应性的机制及环节
药物摄入
药物代谢酶
药物转运体
药物靶点\疾病通 路\代偿机制基因
相关药物
氯吡格雷、卡立普多、奥美拉唑、普 拉格雷、泮托拉唑 塞来昔布、华法林、氟比洛芬、氯沙 坦 可待因、匹莫齐特、阿立哌唑、氟西 汀、伊潘立酮、普萘洛尔、他莫昔芬 伊立替康、尼罗替尼、茚达特罗 硝酸甘油 华法林 恩环类化疗药物 克唑替尼 吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼 特罗凯 、厄洛替尼、西妥昔单抗、 帕尼单抗 赫赛汀 吉非替尼、厄洛替尼
细胞毒性 代谢产物

白血病发病率：2.76/10万 每年新诊断病例4万例， 其中50%为儿童。
无毒代谢产物
个体化用药可降低6-MP不良反应的发生风险
常规剂量
不良反应风险
Cellular TGN Cellular TGN
5000
基因型导向的个体化用药剂量
5000
500
500
0 0 0 10 20 30
HER2基因扩增 EGFR基因扩增
药物代谢酶和药物作用靶点 基因检测技术指南
1.适用范围 2.概述 3.标准术语 4.分析前质量保证 5.分析中质量保证 6.分析后质量保证 7.质量保证 8.制度
适用范围

开展个体化医学分子检测的医疗机构临 床检验实验室 药物代谢酶和药物靶点基因检测ຫໍສະໝຸດ 特别说明 0
10
20
30
基因 检测
6-10% 65% 常规剂量
10 8 6 4 2 0 0 10 20 30
*2, *3A, *3C *1
TPMT Activity
调整用药剂量弥补CYP2C19*2多态对氯吡格雷 活性代谢产物生成及抗血小板效应的影响
Collet JP, et al. JACC Cardiovasc Interv 2011


固定时间：小组织6～12h；大组织6～48h；

石蜡包埋切片：白片，10 μm，切片时更换刀片。 DNA检测需手术标本4～8张，穿刺标本8～10张； 尽量不用于RNA检测；
癌巢划分：HE染色后划分，确保200～400个肿 瘤细胞，肿瘤细胞比例>50%。

穿刺针规格与实体肿瘤穿刺细胞数

FDA建议药品标签中增加药物基因组信息的药物
药物基因组生物标记 UGT1A1变异 KRAS突变 BRAF突变 HER2基因扩增 EML4-ALK融合基因 CYP2C19变异 HLA-B*5701 NAT变异 IFNL3变异 HLA-B*1502 尿素循环障碍 (UCD) CYP2D6 变异 CYP2D6变异 CYP2C19 变异 CYP2D6和ADR1多态性 CYP2C9*3多态性 TPMT变异 代表药物 伊立替康（结直肠癌） 西妥昔单抗（结直肠癌） 维罗非尼（黑色素瘤） 赫赛汀（乳腺癌） 克唑替尼（小细胞肺癌） 伏立康唑（抗真菌） 阿巴卡韦（抗病毒） 异烟肼（抗细菌） PEG-IFN alpha、病毒唑 卡马西平（抗癫痫） 丙戊酸（抗癫痫） 托莫西汀（多动症） 氟西汀（抗抑郁） 氯吡格雷（抗血小板） 美多洛尔（抗高血压） 磺脲类降糖药（降血糖） 硫唑嘌呤、咪唑硫嘌呤（抗排斥） 循环、内分泌、 血液等系统疾病用药 抗肿瘤药物 药物类别



骨髓：血液肿瘤；
胸腹水：肺癌、结肠癌。
标本采集要求

全血和骨髓标本：EDTA或枸橼酸盐抗 凝，静脉血2~3 mL，RNA检测需加 RNA稳定剂；干血斑于无菌滤纸上滴加 50 L全血，自然干燥4h以上；采血管 标注标本信息，一次性使用；
肿瘤组织标本：大小取决于组织类型， 10 mg（米粒大小）—10 g DNA或 RNA；坏死组织比例<70%；无菌盐水 冲洗，置冻存管内液氮冻存，或EP管内 10％中性缓冲甲醛溶液固定。

不同药物治疗有效率存在差异
Data from Felix W. Frueh, Office of Clinical Pharmacology CDER/FDA, 32nd Interna tional Meeting Louisville, KY May 22, 2006
用药安全是临床用药和新药研发的核心
干血斑
干燥的塑料袋或容器中保存，常温 运输，玻璃纸或纸质盖玻片隔开。
骨髓穿刺 2-8C短时间放置，72h内提取 迅速冻存，或1~4h内提 标本 DNA，去RBC -20C可冻存数月。 取RNA；干冰运输。 组织标本 新鲜组织低温运输；甲醛固定标本 干冰运输，提取RNA前 和石蜡包埋组织切片常温运输。 避免解冻。 口腔脱落 常温可保存1周，可常温运输。 细胞
国家卫生计生委个体化医学检测培训基地培训
药物代谢酶和药物作用靶点 基因检测技术指南
陈小平 2015年7月14日
背景 药物治疗是疾病治疗的根本手段

重大疾病（恶性肿瘤、心脑血管疾病等）严重威 胁人类健康，药物治疗仍是根本的治疗手段； 绝大多数药物在约1/3 的患者中不能取得满意疗 效，药物引起的安全性问题备受关注。
抗感染药物
精神类疾病用药
CFDA已获批的个体化用药分子诊断试剂