利用遗传转化技术创造马铃薯（Solanum tuberosum L.）抗病新
材料
马铃薯是一种粮菜兼用型作物，具有悠久的栽培史，其抗病育种工作一直倍受关注。
但由于马铃薯栽培种具有同源四倍体遗传分离的特性，常导致雄性不育和自交不亲和。
因此，通过常规杂交育种很难在较短时间内育成具有抗性的优良品种。
通过新兴的基因工程技术向马铃薯中导入有效的抗性基因，为马铃薯的抗病育种工作开辟了新的途径。
本实验对马铃薯遗传转化体系进行了优化，使转化体系更加简便，且转化频率更为稳定。
利用这一体系把抗真菌的双价基因GLU-CHI和具有广谱抗菌性的抗菌肽基因SPCEMA导入马铃薯中，均得到了转基因的马铃薯新材料。
主要试验结果如下： 1．马铃薯的高效遗传转化体系通过对受体材料和转化条件的比较实验，建立于马铃薯栽培品种“台湾红”的最适转化条件：取生长健壮的马铃薯试管苗茎段和叶片在MS1：MS+BA2.5mg/L+2,4-DO.5mg/L上分别预培养4d和8d；以OD<sub>6</sub>00值为0.5～0.8左右的农杆菌液感染外植体5min；在MS上，23～25℃，黑暗条件下共培养3d；常温下，在120rpm 的摇床上用无菌水脱菌30～60min；在诱愈分化培养基MS1（附加Kan50mg/L和Cef300mg/L）上进行15～20d的抗性愈伤的诱导和筛选；在芽分化培养基
MS<sub>2</sub>
（MS+BA2.5mg/L+GA<sub>3</sub>5.0mg/L+ZT<sub>1</sub>.0mg/L，附加
Kan100mg/L和Cef300mg/L）上诱导抗性芽，20～40d即可获得抗性芽；对抗性芽进行生根及茎段、叶片再生的Kan抗性检测。
2．转基因植株的检测本
实验用双价基因表达载体pBIGLU-CHI转化“台湾红”叶片135个，茎段115个，分化出抗性芽的外植体分别是18个和47个，转化频率分别是13.33％和40.87％；用单价抗菌肽基因表达载体pBISPCAME转化“台湾红”茎段120个，得到抗性芽12个，转化频率为10.00％。
对转双价基因GLU-CHI及抗菌肽基因SPCEMA的Kan抗性芽进行PGR分子生物学检测，结果表明目的基因已随NPTⅡ基因转入马铃薯。
随机抽取9个转双价基因GLU-CHI的株系（试管苗）制备粗酶液，并用化学法检测其几丁质酶量。
对检测资料进行多重比较（LSD法），结果显示，除了其中两个株系外，其
余7个株系的几了质酶量都在极显著水平（α=0.01）上高于对照（非转基因植株），说明外源基因已在转基因植株中表达。