TG＋3H2O 甘油＋3-RCOOH
甘油＋ATP G-3-P＋ADP
G-3-P＋O2 磷酸二羟丙酮＋H2O2
2H2O2＋4-氨基安替比林＋酚 醌亚胺＋4H2O
四试剂
五操作
主要参数见下表
加入物
测定管
标准管
空白管
血清(μl)
20
标准液(μl)
20
蒸馏水(μl)
20
混合试剂(μl)
2000
2000
2000
授课对象
2005级检验
学时
3
时间
120分钟
授课地点
药检学院第三实验室
教材
临床生物化学及生物化学检验实验指导第三版
实验目的
与要求
掌握酶法测定血浆ALT的原理、注意事项及临床意义。
实验器材与试剂
微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、加样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）
实验标本
2)试剂 R1: 双缩脲试剂(双试剂内含酒石酸甲钠作用为溶解CUSO4其中 1为ＮaOH,2为硫酸铜) R2: 校准物53.6g/LR3:蒸馏水
3)操作方法:
双缩脲
R2校准物
R3蒸馏水
待测物
1000μl
20μl
1000μl
20μl
1000μl
20μl
混匀后,置37度水浴10分钟,比色杯光径1.0cm.用540nm波长进行比色,以空白管调零,读取各管吸光度数.
授课对象
2005级检验
学时
3
时间
120分钟
授课地点
药检学院第三实验室
教材
临床生物化学及生物化学检验实验指导第三版
实验目的
与要求
1掌握可见光光谱分析基本技术、原理、操作方法。
2双缩脲法测血清总蛋白的原理、操作方法及临床意义。
实验器材与试剂
微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、加样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）
及 步 骤
概述大课中白蛋白测定及糖测定的一些基本情况及实验室常规检查。
一溴甲酚绿测定血清白蛋白的原理、操作方法及临床意义(只讲解不操作)。
二糖测定的原理：葡萄糖+O2+H2O在葡萄糖氧化酶的作用下生成葡萄糖酸+4H2O，H2O2+4-Aminophenaxone+Phenol在过氧化物酶作用下生成醌亚胺+4H2O。颜色的变化与葡萄糖的浓度成比例，在505nm外测其吸光度的增加与样本中葡萄糖的浓度成正比。
临床生物化学及生物化学检验实验指导第三版
实验目的
与要求
掌握血糖、脑脊液糖测定的原理、操作方法、及方法学评价。
了对糖尿病诊断的临床意义
实验器材与试剂
微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、加样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）
实验标本
已采集的肝素钠抗凝的全血标本
实 验 主 要 内 容
授课章节
第八章血清(浆)脂类及脂蛋白测定
授课对象
2005级检验
学时
3
时间
120分钟
授课地点
药检学院第三实验室
教材
临床生物化学及生物化学检验实验指导第三版
实验目的
与要求
掌握血脂测定的原理、注意事项及临床意义。
实验器材与试剂
微量吸管、吸头、试管、移液管、生理盐水、试剂、蜡笔、加样器、纱布、半自动生化分析仪（GF-D600型）
美国国家胆固醇教育计划对空腹TG水平划分界限的修订意见（1993）是：
TG正常：＜2.23mmol/L(200mg/dl)
增高的边缘：2.3～4.5mmol/L
高TG血症：＞4.5mmol/L胰腺炎高危：＞11.3mmol/L
八临床意义
高TG血症也有原发与继发两类，前者多有遗传因素，其中包括家族性高TG血症与家族性混合型高脂（蛋白）血症等。继发的见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能不足、肾病综合症、妊娠、口服避孕药、酗酒等，但不易分辨原发或继发。高血压病、脑血管病、冠心病、糖尿病、肥胖与高脂蛋白血症等往往有家族聚集现象，其间可能有因果关系，但也可能仅仅是伴发现象；例如糖尿病患者胰岛素与糖代谢异常可继发TG（或同时有TG）升高，但也可能同时有糖尿病与高TG两种遗传因素。冠心病患者TG偏高的比一般人群中多见，但这种患者LDL-C偏高的比一般人群中多见，但这种患者LDL-C偏高与HDL-C偏低也多见。一般认为单独有高TG不是冠心病的独立危险因素，只有伴有高TC、高LDL-C、低HDL-C等情况时才有病理意义。
五实验中注意事项
1）样本中浓度超过线性，用生理盐水稀释样本。
2）本试剂盒中含有叠氮钠，勿吞食及接触皮肤和黏膜。
3）标本采集应尽量在2小时内测定。
六实验临床意义与小结
正常范围在4.2~6.4mmol/l,血糖结果>7.1可确诊为糖尿病。
七示范操作。
实验名称
血清(浆)脂类及脂蛋白测定
教材
选用
《临床生物化学及生物化学检验实验指导》钱士均主编，人民卫生出版社,第3版
实验标本
已采集的肝素钠抗凝的全血标本
实 验 主 要 内 容
及 步 骤
介绍本章介绍应用吸收光谱原理进行分析，可见光光谱分析基本技术、双缩脲法测血清总蛋白的原理、操作方法及临床意义。
简单介绍其它方法1)凯氏定氮法:根据蛋白质平均含氮量16%计算,是公认的参考方法,但该方法操作复杂,不适常规测定.2)酚试剂法呈色灵敏度达双缩脲法100倍左右,有利检出较微量的蛋白质,本法适合测定纯单一蛋白质,易受还原性化合物的干扰如糖,酚等.3)紫外分光光度法:尿酸和胆红素在280nm附近有干扰,不适合血清等复杂的蛋白质测定,适合较纯酶,免疫球蛋白等测定.4)染料结合法优点灵敏快速简单,缺点是不同蛋白质与染料结合不一致,试剂对比色杯有吸附作用.5)比浊法如磺基水杨酸法:该法优点是操作简单灵敏度高,缺点是影响因素多,一般用于测定尿液及脑脊液等蛋白质浓度较低的样品.
操作方法及注意事项
酶法（CHOD-PAP）测定血清中的胆固醇
一）原理
血清中的胆固醇酯（CE）被胆固醇酯水解酶水解成游离的胆固醇（CHOL），后者被胆固醇氧化酶（CHOD）氧化成Δ4-胆甾烯酮并产生过氧化氢。在色原性氧受体（如联大茴香胺，4-氨基安替比林偶联酚）的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色素原，生成有色化合物。反应式如下
4) 计算 T(总蛋白)=T总△A/S校△A*S校(g/L) 参考范围 成人66-88 g/L
5)临床意义:
血浆中总蛋白质浓度增高见:⑴血清中水分减少使总蛋白质浓度相对增高(如呕吐,腹泻,高热及慢性炎症疾病等)。⑵血清蛋白质合成增加(多见骨髓瘤病人,主要是球蛋白增加)。
血浆中总蛋白质浓度降低见于:⑴水盐滞留血液稀释。⑵摄入不足。⑶消耗性疾患(严重结核,肿瘤)。⑷合成障碍(肝功能受损)。⑸丢失增高(如严重烧伤,失血,肾病综合症等)。
胆固醇酯＋2H2O 胆固醇＋游离脂肪酸
胆固醇＋O2 Δ4-胆甾烯酮＋2H2O2
2H2O2＋4-氨基安替比林＋酚 醌亚胺＋4H2O
二）试剂
三）操作
主要参数见下表
加入物
测定管
标准管
空白管
血清(μl)
20
标准液(μl)
20
蒸馏水(μl)
20
混合试剂(μl)
2000
2000
2000
混匀，37℃，孵育5min，用分光光度计，波长500nm比色杯光径1.0cm,以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。
混匀，37℃，孵育5min，波长500nm，比色杯光径1.0cm,以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。
六计算
血清TG（mmol/L）= ×TG标准液浓度
七参考值
正常人TG水平受生活条件影响，我国人低于欧美人，成年以后随年龄上升。TG水平的个体内与个体间差异都比TC大，人群调查的数据比较分散，呈明显偏正态分布。营养良好的中青年平均值以去除FG计约0.90~1.10mmol/L，老年前期与老年人平均超过1.13mmol/L，95百分位数在中青年约为1.69mmol/L，老年约为2.26mmol/L。
教 案
单位
：
郧阳医学院药检学院检验系
教研室
：
临床生物化学与
分子生物学检验教研室
姓 名
：
丁妍
课程名称
：
临床生物化学与检验
时间
：
2009.02.10
实验名称
可见光光谱分析基本技术(双缩脲法测定总蛋白)
教材
选用
《临床生物化学及生物化学检验实验指导》钱士均主编，人民卫生出版社,第3版
授课章节
第一章实验、第七章实验
1)双缩脲法测血清总蛋白的原理:凡分子中含有两个氨基甲酰基(-CONH-)的化合物,在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的化合物的方法称为双缩脲法.而蛋白质中的肽键(-CONH-)也能在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红（蓝）色的复合物，显色强度与样品中蛋白浓度呈正比，故称为双缩脲法。此法简便,灵敏度不高,但对血浆中总蛋白质浓度测定较适用.分析类型为终点法。
7)示范操作及小结
思考题
1光谱分析技术基本原理及注意事项．总蛋白测定的方法学评价
实验名称
白蛋白、血和脑脊液葡萄糖的测定
教材
选用
《临床生物化学及生物化学检验实验指导》钱士均主编，人民卫生出版社,第3版
授课章节
第七章糖及其代谢物的测定
授课对象
2005级检验
学时
3
时间
120分钟
授课地点
药检学院第三实验室
教材
四）计算
血清总胆固醇mmol/L= ×胆固醇标准液浓度
五）参考值
40岁以上人群TC参考范围大致可定为：