三.发光免疫分析的基本测定方法
根据发光反应检测方式的不同可分为 1．液相法 反应在液相中进行，经离心或分离 措施后，再进行测定发光强度 2．固相法 将抗原抗体复合物结合在固相载体 (如聚苯乙烯管)或分离介质上(如磁性微粒球等)， 再进行测定发光强度 3．均相法 同均相酶免疫法，不需要经过离心 或分离步骤，即可直接进行发光强度检测
3.仪器组成
微电脑控制 样品处理系统 实验运行系统 中心供给和控制系统
• 电化学发光免疫分析技术在新一代实验室免疫检测技术中 很有特点，它在20世纪如年代一问世就引起广泛的关注
• 德国公司在链酶亲和素—生物素包被技术基础上，引用电 化学发光免疫分析技术并开发出相应的全自动电化学发光 免疫检测系统
夹心法特点
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。
功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。
线性范围： 功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度。
相关系数：≥0.99的曲线范围。
四、发光免疫分析仪的种类、工作原理和基本结构
(一)全自动化学发光免疫分析系统 采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结
光试剂标记物三氯联吡啶钉[Ru(bpy)3]2+TPA在 电极表面进行电子转移，产生电化学发光 • 光的强度与待测抗原的浓度成正比
(三)全自动电化学发光免疫分析仪
2.仪器组成及特点
• 由样品盘、试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算 机控制系统组成
• 应用三种抗原抗体反应方法：
-抑制免疫法 检测小分子量蛋白抗原 -夹心免疫法 检测大分子量物质 -桥联免疫法 检测抗体如IgG、IgM 另：钉标记用于DNA／RNA探针分析
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免全 疫自 分动 析化 疫分析系统
2．仪器组成
（2）微机系统
程控操作 指示判定 数据处理 故障诊断 自动监视
（二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统
采用微粒子化学发光技术对人体内的微量物质以及药物 浓度进行定量测定 • 具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等特 点
合的免疫分析系统
(一)全自动化学发光免疫分析系统
1．仪器测定原理
该类分析技术有两种方法： -竞争法 测定小分子抗原物质 -夹心法 测定大分子抗原物质
竞争法特点
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值。
功能灵敏度： （变异）≤20%的最低可检测浓度。
线性范围： 功能灵敏度-变异≤20%的最高检测浓度。
（四）发光免疫分析仪的临床应用
主要应用于以下几方面检测： • 1．甲状腺系统 • 2．性腺系统 • 3．血液系统 • 4．肿瘤标记物 • 5．心血管系统 • 6．血药浓度 • 7．感染性疾病 • 8．其他检测 （Ig、血清皮质醇、尿皮质醇、尿游离脱
氧吡啶等）
职业教育医学检验技术专业教学资源库
永州职业技术学院 欧陵斌
电化学发光
酶促化学发光：
辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统
非酶促化学发光：
吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统
按发光持续时间
闪光（Flash）
发光时间在数秒内，如吖啶酯 以原位进样(In Situ Injector) 和时间积分法测量
闪光-辉光测量方式差别
优越性-2
• 适合于复合标记系统多指标测定 • 操作简单，反应快，易实现自动化 • 灵敏度和线性范围超过以往技术
三.发光免疫技术分类
根据示踪物检测的不同而分为： 荧光免疫测定 电化学发光免疫测定 化学发光免疫---再根据标记物的不同又分： -化学发光免疫分析 -微粒子化学发光免疫分析 -电化学发光免疫分析 -化学发光酶免疫分析 -生物发光免疫分析 临床以前三者较为常用。
(三)全自动电化学发光免疫分析仪
1.测定原理及过程
• 待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标记 的抗体共同温育（形成磁性微珠包被抗体—抗原— 发光剂标记抗体复合物）
• 吸人流动室，缓冲液冲洗 • 磁性微粒流经电极表面时，被电极下的磁铁吸引，
而游离的发光剂标记抗体被冲洗走 • 同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发
辉光（Glow）
发光时间在数十分钟以上，如： -HRP-Luminol系统 -AP-AMPPD系统 -黄嘌呤氧化酶系统
无须原位进样、 以速率法测量。
闪光-辉光测量方式差别
闪光尖峰 发光信号
积分法测量
辉光坪区
原位进样
速率法测量
时间
闪光-辉光测量方式差别
优越性-1
消除放射性危害 无半衰期限制，试剂稳定性、有效期延长 实现连续、动态、重复测定
（二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统
1.分析方法 采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为发光剂，扩大测定的范围。 以免疫测定方法为基础： -竞争法 -夹心法 -抗体检测等
（二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统
2.分析过程
抗原抗体结合； 加入碱性磷酸酶标记的抗体； 形成固相包被复合物； 在电磁场中进行2~3次洗涤分离； 加入底物； 通过光量子阅读系统记录发光强度； 在标准曲线上计算出待测抗原的浓度。
相关系数：≥0.99的曲线范围。
(一)全自动化学发光免疫分析系统
2．仪器组成
• 一般由主机和微机两部分组成：
• （1）主机部分：包括
原材料配备部分：反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、 清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置。 液路部分：过滤器、密封圈、真空泵、管道、样 品及试 剂探针。 机械传动部分：传感器、运输轨道。 光路检测部分：光电倍增管和线路控制板。