生物样品预处理预冷解剖用具，采用颈后断头的方法将鱼杀死，立即取肝脏、腮、脑，操作均在4℃下进行，用预冷的0.15 mol/L KCl 溶液洗去血丝，用滤纸吸干后称重。
将肝、脑组织放入预冷的Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 mol/L KCl)匀浆（匀浆比（W/V）1:5），腮组织放入组织匀浆（匀浆缓冲液含40mmol/L咪唑，250mmol/L蔗糖，5mmol/L EDTA，pH7.0），匀浆比为1:40，匀浆速率为10000g，以15s为周期，重复3次。
分别取1ml匀浆液放入1.5ml离心管进行离心，4℃下离心(9000g，20min)，取上清液-80℃下保存，待测。
（1）250mL 0.15 mol/L KCl：取2.7956g（2）Tris-HCl缓冲液：125mL 0.1 mol/L Tris（1.5143g）+ 105mL 0.1 mol/L HCl+ KCl（0.15*0.23*74.55=2.5720g）（Na+＋K+）－ATPase活性的测定1、试剂（1）匀浆液（250ml）：40mmol/L咪唑0.6808g+250mmol/L蔗糖21.3931g +5mmol/LEDTA 0.3653g（2）反应缓冲液（250ml）：80mmol/L咪唑 1.3616g+4mmol/LMgCl2 0.2033 g+40mmol/LKCl 0.7455g（3）16mmol/L Na2ATP（10ml）：0.0988g（4）30%三氯乙酸（TCA）9g TCA+21mlH2O（5）定磷试剂（硫酸亚铁-钼酸胺试剂100ml）：10ml 5mol/LH2SO4+1.3556 g钼酸铵+90mlH2O每10ml加入FeS040.5g（FeS04·7H2O 0.0941g），25ml加入FeSO4·7H2 O 0.2353g，临用前配制。
5mol/LH2SO4：2.7ml H2SO4+7.3mlH2O （6）1mmol/L乌本苷（100ml）：0.0767g（7）50µg/mL磷标准溶液（1000ml）：0.2195gKH2PO42、无机磷标准曲线的绘制：各试管分别加磷标准溶液0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00m1及蒸馏水1.00、0.80 、0.60、0.40、0.20、0 m1，混匀后各吸取0. 08ml加入酶标板，同时加入0.08mlTCA，0.08ml定磷试剂，混匀后650nm处比色测吸光值。
3、酶活性测定ATPase制剂：匀浆比（W/V）为1:40，离心10min（9000r/min）取上清液得到。
总酶活：酶液10µ1+反应缓冲液40µl+H2O 20µ1+ Na2ATP 10µ1（空白用H O代替Na2ATP，空白仍需加入酶液）。
25℃保温15min后加入冷的30%TCA80 2µ1终止反应+定磷试剂80µ1，静置5min后读数。
Mg2+-ATP酶活：酶液10µ1+反应缓冲液40µl+H2O 10µ1+乌本苷10µ1+ Na2 ATP 10µ1，其余同总酶活性测定。
4、蛋白质含量测定1:40匀浆后1:5稀释测蛋白。
5、计算10µl蛋白质含量：X*5*10 µgPi浓度计算：有标准曲线得Y µg/ml10µl酶液的量：m= X*0.08 mlPi的物质的量：n=m/M=m*103/31 nmolATP活性：n*4/蛋白质含量= X*0.08*103*4/31 µmol/mg pro/hSOD酶活性测定1、试剂（1）Tris-HCl 缓冲液0.1mol/l的盐酸：取浓盐酸（密度为1.18，36%）8.4ml，加双蒸水稀释至1000ml。
0.1mol/l 的Tris 溶液：取6.057 克Tris，加水溶解，配成500ml。
Tris-HCl 缓冲液（pH 为8.4，浓度0.1mol/l）：取86ml 0.1mol/l 盐酸，取250ml 0.1mol/l 的Tris 溶液，加双蒸水稀释至500ml。
（2）10mmol/l HCl：取0.1mol/l的盐酸10ml,加双蒸水稀释至100ml。
（3）6mmol/l 邻苯三酚(精确)：用10mmol/l HCl 配制。
0.07567 g+100ml10mmol/l HCl。
2、邻苯三酚自氧化速率的测定邻苯三酚自氧化速率的测定：在酶标板孔中加入300μL Tris-HCl缓冲液，放置酶标仪中25℃恒温10min，加入预热的邻苯三酚及10μL双蒸水，在420nm处每30s 测定一次吸光值，自氧化速率在3 分钟内有效。
调整邻苯三酚用量，使线性范围内吸光度值的变化速率控制在0.020OD/分。
(注：实验时要确定邻苯三酚的用量，可先做8、9、10μL各两个)3、酶活性测定SOD活性测定与步骤2相同，只是将双蒸水换成同体积酶液。
在420nm 下，每隔30 秒钟测吸光度值一次，计算平均每分钟的吸光度变化值△A420/分。
控制SOD 样品液的稀释倍数，使稀释后的样品加入测定体系后，使邻苯三酚自氧化速率的吸光度值逐渐下降，即联苯三酚自氧化速率被抑制50%左右。
注：取组织匀浆时，可先做1、3、5 倍稀释管各两只，以确定稀释倍数。
（参考：将1:9匀浆液再稀释20倍用以测定鱼肝酶活。
（3）计算）SOD 活力单位定义：在规定条件下，1ml反应液中，每分钟抑制联苯三酚420nm下自氧化速率达50%时的酶活力单位（U）或称Marklund 单位。
样品液中每mg蛋白的总SOD活性单位数称为样品液的SOD 比活。
SOD活力(U/ml)= (0.020-△A420)/0.020×100% /50%×V总/ （V 定义·V 样）×样品稀释倍数V 总：反应总体积3（ml）V 样：加入样品液的体积3（ml）V 定义：酶活力单位定义体积1（ml）GST酶活性测定1、试剂（1）0.1mmol/L磷酸缓冲液母液：0.2mol/LNa2HPO4（取Na2HPO4·7H2O 53.65g；Na2HPO4·2H2O 35.61g；N a2HPO4·12H2O 71.64g加蒸馏水定容至1000mL）。
0.2mol/LNaH2PO4（取Na2HP O4·H2O 27.6g；Na2HPO4·2H2O 31.21g加蒸馏水定容至1000mL）（母液浓度为0. 2mol/L，配时注意浓度稀释倍数）PH A(mL) B(mL)6.5 31.5 68.57.0 61.0 39.07.4 81.0 19.08.0 94.7 5.30.1mol/LNa2HPO4·12H2O 500mL：取17.907g；0.1mol/LNaH2PO4·2H2O 1000mL：取15.601g；（2）1.0mmol/LCDNB100m：取0.0202g（巨毒，先用无水乙醇溶解，再加水）（3）1.0mmol/LGSH（现配）10mL：取0.0031g（4）反应体系：100µL0.1mmol/L磷酸缓冲液+10µL1.0mmol/LCDNB+10µL1.0m mol/LGSH+880µL双蒸水（共1mL）2、活性测定10µL酶液+170µL反应体系，340nm读数，20s间隔一次，读3分钟。
GST 活性定义为每毫克蛋白质，每分钟扣除非酶促反应，使GSH浓度降低1 nmol/L 为一个酶活力单位（nmol/mg protein/min）。
3、计算R=180µL，ε=9.6mmol-1cm-1，P=0.54cmGST活性=(OD*R*106)/( ε*W)EROD酶活性测定1、试剂（1）0.1mol/L pH8.0Tris缓冲液100mL：50mLTris（0.1mol/L）+29.2mLHCl （0.1mol/L）PH 0.1mol/LTris(mL) 0.1mol/LHCl(mL)7.1 50 45.77.4 50 42.08.0 50 29.20.1mol/LTris100 mL：1.2114g（2）2. 5 mmol/L NADPH 1mL：0.0021g（药品较贵，且每次配量少，不易取，所以应配在锥形容量瓶中，配药时不用称量勺，拿着小瓶直接往称量纸上倒）（3）40µmol/L乙氧基试卤灵100mL：0.001g2、活性测定10µL酶液+140µL缓冲液+40µL NADPH+10µL乙氧基试卤灵，空白不加NADPH ，25℃保温30min，572nm读数。
3、计算蛋白质浓度：x=(y-0.0269)/0.806 mg/mlε=73mmol-1cm-1EROD活性=(OD*230*106)/(73*10*W*0.685*30)（W为蛋白质含量）GSH含量的测定1、试剂（1）10%TCA：1g +10ml H2O（2）0.4mol/L pH8.9Tris缓冲液100mL：50mL Tris（0.4mol/L）+7mLHCl（0.4mol/L）（3）2.5mM DTNB：0.004g DTNB +2 mL缓冲液（现配，时间长了会变色）（4）25µM GSH储备液：；2、活性测定10µL酶液+10µLTCA+ 200µL Tris缓冲液（0.4M pH 8.9）混匀，25℃或室温孵育5分钟+20µL 2.5mM DTNB，反应总体积240µL，混匀后25分钟，415nm 测吸光值。
3、标准曲线绘制：各试管分别加25µM GSH储备液（零下4℃可放置1个月）0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00m1及蒸馏水1.00、0.80 、0.60、0.40、0.20、0 m1，混匀后各吸取10µl加入酶标板，10µLTCA，同时加入200µLTris缓冲液，25℃或室温孵育5分钟后加入20µLDTNB，混匀后25分钟，415nm测吸光值。
4、计算CAT活性测定1、试剂匀浆后用生理盐水稀释10倍，制得粗酶液。
（1）pH 7.4 60mmol/L磷酸盐缓冲液：（2）基质液：65μmol/mL H2O2，以pH 7.4 60mmol/L磷酸盐缓冲液稀释100mL：24.3ml 0.2mol/L Na2HPO4（100 mL用 1.7406g）+5.7ml 0.2mol/LNaH2PO4（100 mL用0.1778g） +670μl 30% H2O2，稀释至100 mL。