3-8 高效液相色谱法应用举例
3.8.1 3.8.2 3.8.3 3.8.4 3.8.5 正相键合相色谱法 反相键合相色谱法 反相离子对色谱 离子色谱法 空间排阻色谱法
3-8 高效液相色谱法应用举例
3.8.1 正相键合相色谱法
3.8.1.1 正相键合相色谱法测定柴油烃族组成
1 • • • • • • 仪器 HP1050高效液相色谱仪; TFJ-Y100烃族分析仪; 9300型色谱工作站; 7125进样阀、7000六通切换阀; 氨基键合柱,Pherisorb NH2,5μm,4.6mm×200mm; 氰基柱,4.6mm×20mm。
5. 精密度实验 • 取上述对照品溶液(14. 3mg/50mL),在测定条件下 进样8µL(色谱图见图2),重复进样5次。以头孢他啶 侧链酸的峰面积计算,其RSD为0. 12%,精密度很理 想。
6. 回收率的测定 • 将头孢他啶侧链酸对照品定量加入已准确 测定含量的头孢他啶侧链酸中,在选定的实 验条件下,测其回收率,结果见表1。
3 标准曲线制备
• 精密称取一定量的对照品置于100mL容量瓶中,用 流动相稀释至刻度,用超声波振荡溶解,然后用移 液管精密移取5、10、15、20、25mL置于5个50mL 容量瓶中,用流动相稀释至刻度(其浓度分别为 2.86,5.72,8.58,11.44,14.3mg/50mL)。分别取 8μL制备好的对照品溶液进行分析,以色谱峰面积 为纵坐标Y,进样量为横坐标X(mg),绘制标准曲线, 回归方程为:
2 色谱条件
• AlltechODS色谱柱, 250mm×4. 6mm。 • 流动相:溶液A与溶液B以5: 8的比例混合后, 用 2mol·L-1 NaOH 溶液调节pH值至7. 0+0.1, 并过 滤、脱气; 其中: 溶液A为0. 8g溴化四丁基铵和 1. 5 g 聚氧化乙烯月桂醚溶解于250mL乙腈中; 溶液B为0. 1mol·L-1NaH2PO4溶液。 • 检测波长: 263nm;流速: 0. 8mol·min-1;柱温:室 温。
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试样分析
（1）试样溶液的制备 • 称取试样(本院研制的小试样品,为了使杂质峰更清 晰,选取了研制过程杂质含量较高的样品)约0. 01g(精确至0. 0002g)置于50mL容量瓶中,用流动相 稀释至刻度,用超声波振荡溶解。 （2）试样溶液的测试 • 取8µL制备好的试样溶液进行分析。根据保留时间 及加入对照品后峰高增加定性,依据标准曲线进行 定量。色谱图见图1。
3.8.4.4免试剂离子色谱法测定饮用水中阴离子 3.8.4.4
1.仪器
• 美国戴安ICS-90离子色谱仪 离子色谱仪 • Chromeleon6.40色谱工作站 • ASll-HC色谱柱(4mmx250mm) • MMSlll型抑制器 • 电导检测器 • RFC-30淋洗液发生器
3.8.4.5 离子色谱法在油气田水分析中的应用
• 取1 000 mL水样, 本法的最小检出浓度为15.84 ng/L.
3.8.2.2酰胺型反相键合色谱法用于碱性 3.8.2.2 物质的分离
1 仪器与试剂
（1）仪器 HPLC色谱系统由日本岛津LC-10AD泵 SPD-10A多波长紫外分光检测器 Rheo-dyne7125进样阀 江申色谱工作站JS-3000 （2）试剂 Kromasil-5µm硅球(孔径10 nm,比表面积340 m2/g) 氨丙基三乙氧基硅烷(纯度99%,Fluka) 辛酰氯(纯度99%,Fluka) 甲醇(色谱纯,山东禹城化工厂) 水(二次蒸馏,0·45µm微孔膜过滤) 。
• Na2CO3, NaHCO3, NaF, NaCl, NaNO2, NaBr, NaNO3, CH3OH, Na3PO4·12H2O, 以上均为优级纯; 某品牌牙膏。
2. 仪器条件
• 离子色谱仪: 分析柱为AS14 (4 mm×250 mm)阴离子交换柱,保护柱为AG14 (4 mm ×50mm);淋洗液为过水系0.22μm微膜的3. 5 mmol/LNa2CO3- 1.0 mmol/L NaHCO3溶液; 流速为1.0 mL/min;色谱工作站为变色龙; 进样量为25μL; • 抑制器类型为阴离子微膜自动再生抑制器 ASRS; 检测器类型为电导检测器。
3.8.2 反相键合相色谱法
3.8.2.1 反相键合相色谱法测定水中荧蒽
1.仪器和试剂 1.仪器和试剂
(1)Agilent 1100高效液相色谱系统;四元泵;梯度阀;紫外可变 波长检测器. (2)色谱柱:Zorbax Ecplipse XDB-C8柱,长150 mm,内径4.6 mm, 粒度为5μm. (3)SPE固相萃取装置;SPE固相萃取小柱:填料为C18键合相500 填料为C18键合相500 填料为C18键合相 mg,长6 cm;固相萃取抽滤装置. mg, (4)荧蒽标准溶液:质量浓度为33μg/mL(国家标准物质研究中心 提供). （5）荧蒽标准使用液:质量浓度为330μg/L,吸取荧蒽标准储备 液1.0 mL于100 mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度. （6）甲醇、二氯甲烷、异丙醇均为色谱纯;硫代硫酸钠;本实验 用水均为二次蒸馏水
• Metrohm761型便携式离子色谱仪 • 电导检测器 • 离子色谱交换柱Metrosep Anion Supp 5(6. 1006.510); • Millipore纯水系统; • 万分之一电子天平; • AutoScienceAL系列溶剂过滤器; • 以顶端加滤芯(0·45µm)的国产一次性医用注射器 (2mL)作为进样器.
3.8.4.2离子色谱法测定地表水中六种无机阴离子 3.8.4.2 1仪器及试剂
（1）仪器 • DX-600型离子色谱仪(美国戴安公司) • GP50梯度淋洗泵 • ED50电导检测器 • PeakNet IA色谱数据工作站 • 超纯水系统 • 配以Ionpac AG11-HC保护柱、Ionpac AS11-HC分离柱; ASRS-4MM抑制器。 （2)试剂 • NaOH;F-标准溶液(1000 mg/L),Cl-标准溶液(1000mg/L),NO2标准溶液(100 mg/L),NO3-标准溶液(100 mg/L), SO42-标准溶 液(1000 mg/L),PO43-标准溶液(500 mg/L),均由国家标准物 质研究中心提供。溶液均用电阻大于18.2 MΩ超纯水配制。 过滤膜为Auto-science 0.45μm水系膜。
2. 色谱条件
• AG11-HC (50 mm×4 mm)阴离子保护柱, AS11-HC (250 mm×4 mm)阴离子分离柱; ASRS-ULTRA(4 mm)型阴离子抑制器; 抑制电流为59mA, 流动相淋洗 液浓度为20 mmol/L NaOH, 流速1. 0 mL/min; 进样量 为25µL; 此时色谱系统压力为10 342. 5 kPa; 测定温 度为18~28℃。柱温为室温; 电导检测; 以保留时间 定性, 峰面积定量。
3. 结论 • 采用ED50电导检测器,离子色谱法对地表水 中常见阴离子的测定,在选定的色谱条件下, 一次进样25μL,可在15分钟内检测F-, Cl-, NO2-,NO3-, SO42-, PO43-六种阴离子,具有较 高的灵敏度和准确度,重复性好,该方法操 作简便,具有较高的实用价值。
3.8.4.3 离子色谱法测定降水中常见阴离子 1. 仪器
3.8.5 空间排阻色谱法
3.8.5.1 分子排阻色谱对蛋白质的分离
1. 仪器
• Waters209型高效液相色谱仪 • 检测器为SPD-1型UV-vis可变波长检测器，检测波长λ=254 SPD-1 UV-vis λ=254 nm, • 色谱柱为150mm×4·00 mm i.d.不锈钢柱, ZTJ-型装填机。
2 试剂
• 正己烷 分析纯,活化后经硅胶脱芳烃、过 滤、除气后使用; • 二氯甲烷 经蒸馏、分子筛脱水、过滤、除 气后使用。 3.氢火焰检测器(FID) 3.氢火焰检测器(FID) 主要操作参数 氢火焰检测器 • 催化炉温度350℃;氧化炉温度750℃;清洁 炉温度800℃;喷雾压力0.04 MPa; H2流速 45ml/min; N2流速17ml/min。
2. 结果与讨论
(1) 分别配制不同含量的荧蒽标准溶液, 按样品测定方法作校 正分析, 得到不同的荧蒽峰面积, 以各组分的峰面积对浓度 作图, 各点在试验范围内线性良好, 其线性回归方程为 Area=0.038 182 5 Amount-0.333 916, 相关系数为0.999 9. (2)为了考察方法的精密度, 对几个浓度的样品进行了平行测 定, 得到其相对标准偏差为0.98%~5.70%。 (3)最小检出浓度的测定: 在样品测定的色谱条件下, 待仪器稳 定后, 记录空运行时的色谱图和数据, 打印信噪比报告, 按 下式计算最小检出浓度:
（1）采用液相色谱分离、移动丝氢火焰检测器分析柴油 馏分(180-370℃)的饱和烃和烯烃总量、单环芳烃、双 环芳烃、多环芳烃和胶质类组分的含量是可行的。该法 具有简单、快速、准确、分析时间短 简单、 简单 快速、准确、分析时间短等优点。 （2）通过方法的准确性和可靠性检验,饱和烃和芳烃在较 宽的范围内均有良好的线性。 （3）移动丝氢火焰检测器 移动丝氢火焰检测器与解决了不同油品响应因子不 移动丝氢火焰检测器 同的问题,提高了测定结果的准确性,是目前测定重馏分 油最合适的检测器,但相对而言该检测器的操作较繁琐。 总之,该方法的建立对柴油加工工艺的优化及柴油产 品的质量评价有着积极的作用,它也可作为柴油烃族组 成基础数据的测定手段,为快速近红外光谱分析打下基 础。
7. 操作条件及注意事项
• 头孢他啶侧链酸是一个极性物质,用普通的反相色 谱难以分离,采用离子对色谱可达到满意的分离效 果。在样品峰的前面有未知杂质峰, 流动相采用 水、乙腈溶液, 磷酸盐做缓冲溶液, 溴化四丁基 氨做为离子对试剂。 氨做为离子对试剂。 • 流动相的pH值定为7, pH值过高、过低分离效果都 不好。 • 检测波长选用263nm,曾用过254、260nm,稳定性 263nm最好。 • 由于流动相中含有无机盐, 容易析出结晶而堵塞 或磨损色谱柱和仪器, 因此, 每次测试完毕要用 水和甲醇充分冲洗仪器和色谱柱。