生物化学实验报告
姓名: 学
号: 专业
年级:
组另I」:
生物化学与分子生物学实验教学中心
指导老师
格式要求： 正文请统一用： 小四号，宋体， 1.5 倍行距；数字、英文用 Times New
Roman ；标题用： 四号，黑体，加粗 。
需强调的地方请用 蓝颜色标出。
不得 出
现多行、多页空白现象。
一、实验目的
1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；
2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；
3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；
4、正确掌握使用离心机的方法步骤；
5、熟练运用溶液混匀的各种方法；
6、正确掌握溶液转移的操作；
7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤
二、实验原理
实验 1 肝糖原的提取与鉴定 糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使 肝细胞破碎。
肝细胞破碎，细胞内容物流出。
低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破 坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分
离糖原与蛋白质等其他成分的目的。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用 乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这 是糖原中葡萄
实验名称 Folin- 酚试剂法测定蛋白质含
量
实验日期
实验地点 合作者
评分
教师签名
批改日期
95%
糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。
糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min 后会出现砖红色沉淀。
CuS04 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(0H)2
2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O
2CuOH = H20 + Cu20；(红色)
Cu(0H)2 ==== H20 + CuOj (黑色)
实验2 肝糖原定量测定
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，保留肝糖原。
糖原可以被浓酸水解成葡萄糖，而浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成5-羟甲基呋喃甲醛，该化合物与蒽酮脱水缩合可以生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10-100ug溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比。
利用该反应原理处理标准葡萄糖溶液，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
三、材料与方法：以流程图示意
1、实验材料
(1)肝糖原的提取与鉴定
样品：1.50g的鸡肝
试剂：5%三氯醋酸溶液、95%乙醇、蒸馏水、浓HCl 溶液、50%NaOH 溶液、碘试剂和班氏试剂
仪器和器材：离心机、天平、试管、试管架、研钵、玻璃棒、室温-100 C恒温水浴箱、
剪刀、镊子、刻度吸管、加样枪和白瓷反应板
(
2)肝糖原的定量测定
样品：0.15g的鸡肝
试剂：30%KOH溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液和0.2%蒽酮溶液显色剂
仪器和器材：室温-100C恒温水浴箱、比色皿、100ml容量瓶、分光光度计、试管、剪刀、镊子、刻度吸管和微量加样枪
3、实验步骤与方法
(1)肝糖原的提取与鉴定:
沉淀(弃
去)——
+2ml 95%乙醇，混匀，静置
10min
离心5min(4000r/min )
沸水浴2min,溶解沉淀
鸡肝约1.5g,剪碎+1ml 5%三氯醋酸，研磨至乳状
全部转入离心管中，离心__________________________
5min(4000r/min )
+3ml 5%CCI3COOH 三氯醋酸，
研磨成肝匀浆
上清液(取2ml)
+班氏试剂4滴
混匀
沸水浴2min,观察变化
图一：肝糖原的提取与鉴定实验流程
(2)肝糖原定量测定
糖原溶液1ml
白瓷板孔穴中
+浓HCI 5滴
糖原水解液
糖原水解液2滴
鸡肝0.15 g ， 加 30%KOH 1.5ml 沸水浴15分钟
冷却，全部转入
100 ml 容量瓶中
糖原的测定
加水至标线，仔细
混匀，此为糖原提 取液 -------------
图二：肝糖原定量测定试验流程
取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0————
标准匍萄糖溶液—— 1.0——
糖原提取液———— 1.0
0.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5
表一：糖原测定试管操作
混匀，沸水浴10分钟，冷却至室温。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A ）。
四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。
1、实验现象
实验一：肝糖原的提取与鉴定
①所获糖原溶液如下图：
图三：所获糖原溶液
②将糖原溶液滴到碘试剂中可以勉强看到溶液出现浑浊，砖红色沉淀不明显，说明样
③糖原水解液与班氏试剂混合后溶液变深蓝。
沸水浴加热2min后，产生浑浊，砖红色品鸡肝中糖原含量少
图四：糖原溶液与碘试剂反应
沉淀不明显，说明样品鸡肝中糖原含量少
图五：糖原水解液与班氏试剂混合沸水浴后
实验二：肝糖原的定量测定
空白管、标准管和样品管混匀呈现如下颜色反应
图六：加入蒽酮溶液并且水浴过后的空白管、标准管、样品管（由左至右）对比2、吸光度数据记录:
620nm波长吸收度值记录
测定次数-
各管吸光度值A620
空白管标准管样品管
100.6720.099
200.6710.101
300.6720.102各管平均值00.6720.101
表二：620nm波长吸收度值记录表
3、结果计算：
A样品100 100
0. 05 1. 11 根据公式：肝糖原（g/100g肝组织）=A标准肝组织重（g）
1000
计算结果得样品肝糖原（g/100g肝组织）=0.56g/100g肝组织
故本次实验结论为：该鸡肝样品含有肝糖原，且肝糖原含量为0.56g/100g肝组织' 4、结果分析
经查阅资料得：饱食鸡肝的肝糖原含量为：2〜3g/100g肝组织，而本次实验测得肝糖原=0.56g/100g肝组织，即本次实验测得的肝糖原含量偏低。
5、讨论总结
（1）与碘试剂反应时：加入糖原的孔穴并没有出现预期的明显红棕色。
究其原因，在取糖原沉淀时，沉淀很少，糖原含量也很少。
而又因为碘试剂本身是黄色的，本来现象就不是很明显，这样一来，几乎看不到反应会产生的红棕色了，说明糖原含量极少。
（2）糖原中葡萄糖的鉴定：实验结果也没有如预期中的蓝色溶液沸水浴后变为砖红色。
原因还是糖原含量极少，又加过少量酸与碱，浓度更小，现象更不明显，所以观察不到明显的砖红色。
（3）在肝糖原定量测定中，三只试管水浴15min 后，标准管颜色最为明显，为绿色，加入的是标准葡萄糖溶液，样品管与空白管颜色依次递减。
（4）由资料可知饱食鸡肝糖原含量宜在2〜3g/100g肝组织，而本次实验测得肝糖原为
0.56g/100g肝组织，偏低。
究其原因，实验中操作没有失误，与其他小组和其他实验室
对比，发现各小组结果均偏低，可以推测，实验现象不明显原因是鸡肝材料糖原含量偏低。
6、结论：本次试验为《肝糖原的提取、鉴定与定量》，通过这次实验掌握了组织样品的制备方法，了解了其注意事项；了解了肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握了其操作方法。
巩固了正确操作使用刻度吸管和移液枪。
掌握了溶液转移的操操作，复习巩固了正确操作分光光度计。
实验中没有错误与过失，结果正常。
呈色反应、颜色观察与定量测定都正确成功。