7.计算
试按样式(中1阿)计维算菌素(B1a+B1b)的质量分数X1(%)
式中: A积1和—的—平—均两值针;标样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 A积2和—的—平—均两值针;试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 m1———标样的质量,g; m2———试样的质量,g; p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分 数,%。
8.结果和讨论
8.1线性关系试验 在一定质量范围内,按照浓度递增的顺序配制
数个已知样,按上述操作条件进行分析。以阿维菌 素标样质量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲 线。此标准曲线通过原点。计算得回归方程为 Y=2.52×108X+4.69×103,线性相关系数r =0.9999。试验证明当阿维菌素浓度在0.004 g/100 mL~0.2 g/100 mL之间(进样体积5μL) 与其相应的峰面积呈现良好的线性关系。
Pak C18、5μm填充物;(Waters ) 过滤器:滤膜孔径约0.45μm; 微量进样器:50μL; 定量进样管:5μL; 超声波清洗器; 甲醇:色谱级; 水:新蒸二次蒸馏水; 乙腈:色谱级; 阿维菌素标样:已知阿维菌素(B1a+B1b)质量分数≥98.0
%。
4. 色谱操作条件
谢谢！
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
5.1标样溶液的制备 称取阿维菌素标样0.05 g(精确至0.00
02g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并 稀释至刻度,摇匀。 5.2试样溶液的制备
称取含阿维菌素0.05 g的试样(精确0.0 002 g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解 并稀释至刻度,摇匀。
6.测定
在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续 注入数针标样溶液,直至相邻两针阿维菌素 峰面积相对变化小于1.5 %后,按照标样溶 液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺 序进行测定。
2.阿维菌素结构Biblioteka 阿维菌素的天然发酵产物共有8个组分A1a,A21,A2a,A2b,B1a, B1b,B2a和B2b,它们的区别主要在于C25,C222,23和C226位所 连接的基团不同。
3 仪器和试剂
高效液相色谱仪:具有紫外可变波长检测器;(岛津公司LC10A
色谱数据处理机;(CLASS-10A工作站。) 色谱柱:150 mm×3.9 mm(id)不锈钢柱,内装Nova-
阿维菌素的液相色谱分析
1.阿维菌素介绍
阿维菌素的产生菌———阿维链霉菌(Streptom yces avermitilis)是1975年日本北里研究所从 日本静岗县的一个土壤样品中分离得到的.阿维链 霉菌自发现以来,以日本北里大学和北里研究所以 及美国Merk公司为主的研究小组分别对它开展了 深入研究,形成了一个重要的抗生素研究领域.与 其他链霉菌一样,阿维链霉菌不仅具有复杂的形态 分化,也具有合成多种次级代谢产物的能力,由它 产生的阿维菌素在医药、农业及畜牧业上有着重 要的商业价值.目前对阿维链霉菌的研究主要集中 在阿维菌素的生物合成领域.
流动相:甲醇+乙腈+水=38+38+24,膜过 滤,并进行脱气;
流量:1.0 mL/min; 柱温:室温(温差变化应不大于2℃); 检测波长:245 nm; 进样体积:5μL; 保留时间:B1a15.6 min, B1b11.3 min。
典型阿维菌素乳油高效液相色谱图见图
5.溶液的配制
8.2 方法精密度试验
对阿维菌素原药、乳油按上述操作条件进行 多次重复测定,试验表明该定量方法具有较好的精 密度。其标准偏差分别为0.32、0.0089,变异系 数分别为0.34 %、1.1 %。
8.3 方法准确度试验
称取数个已知含量的阿维菌素原药、阿维菌 素乳油试样,分别加入一定量的阿维菌素标准品, 按本方法测定其中阿维菌素总质量并计算回收率。 阿维菌素原药、乳油的平均回收率分别为99.9 %、100.4 %,表明该方法具有良好的准确度。
8.4 最佳操作条件的选择
8.4.1 检测波长的确定 由阿维菌素的紫外光谱图可以看出,
阿维菌素B1a和B1b的最大吸收波长均 在245 nm附近,由于流动相在该波长处 无吸收且对B1a和B1b峰位置无干扰,故 检测波长确定为245 nm。
8.4.2 流动相的选择
我们首先用单纯的甲醇+水作流动相,结果部 分厂家的乳油产品中B1a和杂质峰分离不开。因 此又改用乙腈+水作为流动相,但B1a和B1b不能 与杂质完全分离。最后尝试用乙腈+甲醇+水作流 动相,改变乙腈和甲醇之间的比例,发现当乙腈与 甲醇比例小于1时,B1a和杂质不能完全分离。当 乙腈与甲醇比例大于1时,B1b和杂质不能完全分 离,当乙腈和甲醇比例在1附近时B1a和B1b均能 与杂质完全分离,因此确定采用甲醇+乙腈+水 =38+38+24为最佳流动相配比。在采用不同的 色谱柱分析时发现:为得到合适的保留值和分离度 可适当的改变体积比为1的乙腈甲醇溶液与水的比 例和(或)流速。