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Western Blot试剂配方

9.3
11.5
13.9
18.5
23.2
30% Acrylamide
1.3
2.7
4.0
5.3
6.7
8.0
10.7
13.3
1.5MTris-Hcl(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
ddH2O 900mL
Tween-20 0.5mL
1ml
2ml
3ml
4ml
5ml
6ml
8ml
10ml
H2O
0.68
1.4
2.1
2.7
3.4
4.1
5.5
6.8
30%Acrylamide
0.17
0.33
0.5
0.67
0.83
1.0
1.3
1.7
1.0MTris-Hcl(pH6.8)
0.13
0.25
0.38
0.5
0.63
0.75
1.0
1.25
10%SDS
0.01
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.02
0.024
0.032
0.04
浓缩胶配方表(5%)
各种凝胶体积所对应各种组分的量
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.02
0.024
0.032
0.04
15%
H2O
1.1
2.3
3.4
4.6
5.7
6.9
9.2
11.5
30% Acrylamide
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
20.0
25.0
1.5MTris-Hcl(pH8.8)
组分名称
8%分离胶
12%分离胶
10%分离胶
H2O
16.2
11.5
13.8
30%Acrylamide
9.3
14
11.7
1.5MTris-Hcl(pH8.8)
8.8
8.8
8.8
10%SDS
0.38
0.38
0.35
10%过硫酸铵
0.35
0.38
0.35
TEMED
0.028
0.028
0.028
5%浓缩胶(14mL,四块1.5mm的胶,每块胶约3mL)
10×电泳缓冲液100mL
ddH2O990mL
10%SDS10mL
充分混匀
1×转膜缓冲液:
10×转膜缓冲液100mL
ddH2O700mL
无水甲醇200mL
充分混匀,放置4℃保存。
10×TBS缓冲液
Tris-Hcl 24.2g
NaCl 80g
蒸馏水至1000mL
1×TBS-T
10×TBS缓冲液100mL
Western Blot凝胶配制
分离胶配方表:
不同凝胶体积所对应各种组分的量
5mL
10mL
15mL
20mL
25mL
30mL
40mL
50mL
6%
H2O
2.6
5.3
7.9
10.6
13.2
15.9
21.2
26.5
30% Acrylamide
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
8.0
10.0
1.5MTris-Hcl(pH8.8)
组分名称
体积(mL)
H2O
9.5
30%Acrylamide
2.37
1.0MTris-Hcl(pH6.8)
1.75
10%SDS
0.14
10%过硫酸铵
0.14
TEMED
0.014
10×电泳(转膜)缓冲液:
Tris30.3g
甘氨酸144g
SDS10g
用ddH2O定容到1000mL,常温储存
1×电泳缓冲液:
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.02
0.024
0.032
0.04
12%
H2O
1.6
3.3
4.9
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
02
0.024
0.032
0.04
10%
H2O
1.9
4.0
5.9
7.9
9.9
11.9
15.9
19.8
30% Acrylamide
1.7
3.3
5.0
6.7
8.3
10.0
13.3
16.7
1.5MTris-Hcl(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.02
0.024
0.032
0.04
8%
H2O
2.3
4.6
6.9
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.1
10%过硫酸铵
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
006
0.08
0.1
TEMED
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
0.008
0.01
常用配方表:
分离胶(35mL,四块1.5mm的胶,每块胶7.5-8mL)
各组分体积(mL)
6.6
8.2
9.9
13.2
16.5
30% Acrylamide
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
12.0
16.0
20.0
1.5MTris-Hcl(pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5.0
6.3
7.5
10.0
12.5
10%SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10%过硫酸铵
0.05
0.1
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