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Western blot试剂配方

SDS-PAGE相关试剂、缓冲液的配置方法
1.5M Tris-HCl 组分浓度:1.5M
配制量:200ml
配制方法:1.称量下列制剂,置于250ml蓝口瓶中。

Tris-base 36.33g
2.向烧杯中加入约150ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.调pH=8.8(在磁力搅拌器上进行),定容至200ml,
4℃保存
1.0M Tris-HCl 组分浓度:1.0M
配制量:200ml
配制方法:1.称量下列制剂,置于250ml蓝口瓶中。

Tris-base 24.22g
2.向烧杯中加入约150ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.调pH=6.8(在磁力搅拌器上进行),定容至200ml,
4℃保存
1.0M Tris-HCl 组分浓度:1.0M
配制量:200ml
配制方法:1.称量下列制剂,置于250ml蓝口瓶中。

Tris-base 24.22g
2.向烧杯中加入约150ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.调pH=7.5(在磁力搅拌器上进行),定容至200ml,
4℃保存
10%SDS (W/V)组份浓度:10%(W/V)SDS
配置量:200ml
配制方法: 1.称取2g SDS。

2.加入200ml的去离子水后搅拌溶解。

注意:溶解定容SDS时不宜剧烈摇晃,避免产生过多的泡沫;10%SDS溶液在低温是易析出晶体,可以置于70℃溶解。

30%(W/V)丙烯酰胺组份浓度:30%(W/V)Acrylamide
配制量:200ml
配制方法:1.称量下列制剂,置于1L烧杯中。

丙烯酰胺58g
N-N亚甲基双丙烯酰胺2g
2.向烧杯中加入约150ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至200ml,用定性滤纸滤去
杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%APS (W/V)组份浓度:10%(W/V)过硫酸铵
配置量:1ml
配制方法: 1.称取0.1g过硫酸铵。

2.加入1ml的去离子水后搅拌溶解。

3.贮存于-20℃
注意:10%过硫酸铵溶液在-20℃保存时可使用2周左右,超过期间会失去催化作用。

5×电泳缓冲液组份浓度:0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V)SDS
配置量:1L
配制方法:1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。

Tris 15g
Glycine 72g
SDS 5.0g
2.加入约800ml的去离子水,搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容到1L后,4℃保存。

转印缓冲液组份浓度:0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,
配置量:1L
配制方法:1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。

Tris 3g
Glycine 14.4g
甲醇200ml
2.加入约800ml的去离子水,搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容到1L后,室温保存。

考马氏亮蓝染色液组份浓度:0.25%(W/V)考马氏亮蓝45%(V/V)甲醇10%(V/V)
冰乙酸
配制量:100ml
配制方法:1.称量0.25g考马氏亮蓝,置于烧杯中
2.量取45ml的甲醇加入上述烧杯,搅拌溶解
3.加入10ml乙酸,搅拌均匀。

4.加入45ml去离子水,搅拌均匀。

5.用滤纸出去颗粒物质后,室温保存
考马氏亮蓝脱色液组份浓度:10%(V/V)冰乙酸45%(V/V)甲醇
配制量:100ml
配制方法:1.称量下列溶液,置于烧杯中
冰乙酸10ml
甲醇45ml
去离子水45ml
2.充分混匀后使用
5×上样缓冲液
配置量:10ml
配制方法:1.称量下列试剂,置于100ml血清瓶中。

1M Tris-HCl (pH=6.8) 0.6ml
甘油 2.5ml
10%SDS 2ml
巯基乙醇0.5ml
溴酚蓝0.01g
去离子水 4.4ml
2.混匀后1ml分装于指形管中,-20℃保存。

TBST 组份浓度:
配制量:1L
配制方法:1.称量下列制剂,置于1L烧杯中。

1M Tris-HCl (pH=7.5):10ml
NaCl:5.8g
2.加去离子水将溶液定容至1L。

3.加500μl Tween-20,磁力搅拌器混匀。

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