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树突状细胞 （ｅｄｉｃ ｅｓ Ｃ ｄｎｒｉ ｃｌ，Ｄ ）由 Ｓ ｉ ａ ｔ ｌ ｔｎ ｎ和 ｅｍ
司 ， Ｐ Ｉ６ ０ 自Ｇｂｏ Ｒ Ｍ １４ 购 ｉ 公司 ， 巴细胞分离液购 自 ｃ 淋
天津 Ｔ Ｄ研究所 ，Ｓ Ｂ Ｂ Ａ Ｃ试 剂盒 购 自武汉博士 德公 司。
Ｃｈ 在 １７ ｏｎ ９３年首先发现 ，它是哺乳动物体内功能最 强 也 是 唯 一 能 激 活 初 始 Ｔ细 胞 的抗 原 呈 递 细 胞
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实用医学 杂志 ２ ０ 年第 ２ 卷第 ４ ０５ １ 期
３ｌ ６
・
基 础 研 究 ・
人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞 的 形态学观察与功能研究
史毓杰 江振友 董 军
摘 要 目的：探讨从人 外周血单核细胞体外培 养扩增的树突状细胞 （ｅｄｉｃｃｌ， Ｃ ｄ ｎｒｉ ｅｌ Ｄ ）形 态学特征及 其活 ｔ 性。方 法 ： 人外周血 常规 分 离单个核细胞 ， 附 ６ｈ后去 除悬浮细胞 ，以细胞 因子粒细胞 一巨噬细胞 集落刺激 因子 粘 （ Ｍ—Ｓ ） 白细胞介素 一 （ 一 ） Ｇ ＣＦ 、 ４ Ｉ ４ 进行诱 导培养 ７ｄ， Ｌ 并进行形 态学特征 ， 细胞表 型和淋巴细胞 刺激 能力鉴定。结果 ： 培养 １周即可得到 大量 Ｄ 形态学观 察可见细胞形 态不规 则 ， Ｃ， 细胞表 面大量 突起 ， 为典型的 Ｄ Ｃ特征 ， 免疫组化和 间 接免疫 荧光显示 Ｃ ｌ Ｄ ａ阳性表达率达 ８ ％ ～ ５ ， ０ ９ ％ 并能刺激 同种淋 巴细胞增 殖反应 。结论 ： 外周血单核 细胞 可经 人
５ ％ Ｃ ． Ａｆ ｒ ６ ｈ ｕ ｓ ｎ ｎ ｄ ｅ ｅ ｔｃ ｌ ｅ ｅ ｇ ｎ ｌ ｅ Ｏ２ ｔ ｏ ｒ． ｏ ａ ｈ ｒ ｎ ｅ ｌ ｗ ｒ ｅ ｔ ｒｍｍ ． ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｈ ｒ ｎ ｅｌ ｗ ｒ ｕ ｔ ｒ ｄ ｉ ｄ ｕ ｉ ｅ ｓ ｙ ｅ ｄ ｎ ｈ ｄ ｅ ｅ ｔｃ ｌ ｅ ｅ ｃ ｌｕ ｅ ｎ ｍｅ ｉ ｍ ｗ ｔ ｓ ｈ
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实用医学杂志 ２０ 年第 ２ 巷第 ４ ０５ １ 期
呈圆形、 椭圆形 、 不规则形等 ， 体积 比单核细胞大 １ ～ 细胞并鉴定 。 １５ 图 １． ． 倍（ ） １３ 瑞氏染色 收集细胞 ， ． 涂片 、 干燥后丙酮固定 ， ２２ 形态学观察 瑞氏染色细胞染成蓝色 ，体积稍 ． Ｐ Ｓ ２次， Ｂ洗 空气干燥 ， 氏染液染 ｌ ｉ后加蒸馏水 大， 瑞 ｎ ａ ｒ 核深染 ， 形态不规则 ， 细胞膜边界不清． 表面有毛 混匀， 染色 １ ｉ， ０ｒｎ 流水冲洗， ａ 干燥后中性树胶封片， 刺样或树突样突起 （ ２ 扫描电镜见细胞形态不规 图 ） 镜检 则， 表面有大量突起。 １４ 扫描电镜 细胞接种盖玻片 （ ． 用多聚赖氨酸处 理 ）干燥后 ＰＳ清洗 ５ｍｎ 次 ｘ ，．％戊二醛固定 ， Ｂ ｉ ｔ ／ ２５ ３ ２ｈ Ｂ 清洗 ５ｒｎ 次 ｘ ，酒精梯度睨水 （Ｏ 、 ．ＰＳ ｉ／ ａ ５ ５％
Ｇｒ ｕ ｃｔ／ ａｒｐ ａｅ ｏｏ）ｓｍｕ ｔ ｇｆ ｔｒ Ｇ — Ｓ ） ｎ ｔｒ ｕ ｉ一（Ｌ４ ａ３ ℃ ． ｕ ｄｆ ｄ ％ Ｃ ２ｏ ｏｅ ａ ｌ ｙｅ ｍ ｃｏ ｈｇ ｌｎ一 ｉ ｌ ｉ ｃ （ Ｍ Ｃ Ｆ ａｄｉ ｅ ｅｋｎ４ Ｉ一 ） ｔ ７ ｎｏ ｃ ，ｔ ａ ｎ ａ ｏ ｎ ｌ ｈ ｍｉ ｉ ｉｅ ５ Ｏ ｒ ｒ ｆ ｍ
ｍ ｏ／ ， ｍ ｌＬ 青霉素、 链霉素各 １０Ｕ ｍ ，０ ０ ／ Ｌ １％小牛血清） 调整细胞数 ２ ｍ ， １ ／ Ｌ 加入 ６孔板， Ｘ０ 每孔 ２ Ｌ ３ ｃ ，７ ｍ ｃ
５ Ｃ２ ％ ０ 培养箱培养 ６ｈ 吸弃上清， Ｐ Ｓ ， 用 Ｂ 轻洗 ２ ， 次 去除非粘 附细胞 ，每￣ ； 人含 １％新鲜小牛血清 的 Ｌ ｇ Ｊ ０ １４ 培养液 ２ｍ 及细胞因子 Ｇ —Ｓ 、Ｉ一（ ６０ Ｌ Ｍ Ｃ Ｆ Ｌ４ 终浓度
１ 资 料 与 方 法
１２ 正常人外周血 Ｄ ． Ｃ体外诱导培养 无菌取新鲜
人外周血 ５ Ｅ 来 自广州市 中心血站） 肝素抗凝 （０ ０ｍ （ ， ２ Ｕ ｍ ） 用生理盐水 １ １ ／ Ｌ， ： 比例稀释后缓慢沿离心管管 壁加到淋 巴细胞分离液上 ， 离心（ ８０ｇ ｍｎ ２ ｉ） １ ０ ／ ｉ， ｍｎ ０ 取 中间白色云雾层细胞 ， 生理盐水洗涤 ２ （ ００ｇ 次 １ ０ ／
Ｇ Ｃ Ｆ １ ０ｎ ／ ， 一 ０ｎ ／ ）置 ３ ℃ ５ Ｃ ２ Ｍ— Ｓ ０ ｇ ｍＬ Ｉ ４５ ｇ ｍＬ ， ７ Ｌ ％ Ｏ
作者单 位： １６ ２ 广州 市， ５ ０ ３ 暨南大学微生物 与免疫学 教研室 （ 史 毓杰 ， 振友） 病理生理 教研室（ 江 ， 董 军）
培养箱继续培养 ， 每隔 ３ｄ 半量换液 ， 加入全量细胞因
（ ｔｅ ｒ ｅｔ ｇ ｅ ， Ｐ ） 在机体的免疫应答 中 ａ ｉ ｎ ｐｅ ｎｉ ｌ Ａ Ｃ ， ｎｇ ｓ ｎｃｌ 起关键 的调节作用 。 但是 由于 Ｄ 在组织中含量极少 ， Ｃ
在血液中仅 占单个核细胞总数的 ０ １ ～１０ ＿， ．％ ． ％ 】 难 １ 以分离 、 纯化 ， 因此限制 了 Ｄ Ｃ的研究和应用 。本研究 从正常外周血获取贴壁单核细胞 ，在细胞因子作用下 培养扩增出 Ｄ ， Ｃ 并通过对其形态、 表面标记及功能进 行鉴定 ， Ｄ 为 Ｃ的进一步研究提供必要条件。
Ｇｕ ｎ ｚ ｏ ６ ２ Ｃｈ ｎ ａ ｇ ｈ ｕ ５１ ３ ． ０ ｉａ
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１ １ 主要试剂 重组人粒细胞 一 ． 巨噬细胞集落刺激 因子 （ Ｇ —Ｓ ）重组人 白细胞介素 一 （ ｌ一） 自 ｒ ＭＣ Ｆ ， ｈ ４ ｒ Ｌ４ 购 ｈ 深圳晶美公 司，鼠抗人 Ｃ １ 单克隆抗体购 自 京中 Ｄａ 北 山生物技术公司 ， 小牛血清 （Ｃ ） 自杭州 四季青公 ＦＳ 购
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Ｇ Ｃ Ｆ Ｉ一 导培养成 Ｄ ， Ｍ—Ｓ 、Ｌ４诱 Ｃ 具有典型的树 突状 细胞 的形 态学特征及抗原 呈递 能力。 关键 词 单核 细胞 树突细胞 粒细胞 巨噬 细胞 集落刺激 因子 白细胞介素 ４