②当不同的蛋白质通过凝胶时，分子量较小 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较 长，移动速度较慢
③分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通
道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速
度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此
得以分离
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（4）依据的特性 蛋白质分子量的大小
（5）具体过程
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3.类型:
琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。
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聚丙烯酰胺凝胶电泳
1、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸钠 （SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝 胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N’-亚甲基双丙 烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成的 具有三维网状结构的凝胶。
3、缓冲溶液的配制
通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调 节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围 内使用的缓冲液
4、缓冲溶液的组分分类
①弱酸和弱酸盐组合
H2CO3 CH3COOH
NaHCO3 CH COONa 血红蛋白的提取和分离3(试用版)
②弱碱和弱碱盐 NH4OH
NH4CL
③多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐
NaH2PO4
Na2HPO4
KH2PO4
K2HPO4
如何证明色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？
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（五） 电泳：
1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2.原理①：许多重要的生物大分子，如多肽、
核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下， 这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所 带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的 差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电 分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种 分子的分离。
9、蛋白质结构的多样性 氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺 序变化多端；多肽链的空间结构千差万别
10、生理功能
细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组 织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、 催化等作用，是一切生命活动的主要承担者
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(二）蛋白质的提取
1、分离生物大分子的基本思路
2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了和蛋白质组
人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传信息
蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。 主要是对蛋白质功能的研究
血红蛋白的提取和分离(试用版)
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一、基础知识 (一）蛋白质 1、含量
占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的 有机物 2、组成元素
4、 SDS作用机理
SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组 成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单 条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子 量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS 复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白 质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种电荷间 的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的 大小
（1）概念：根据被分离物质的蛋白质相对分 子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分 子筛作用，来进行分离
（2）凝胶
①性质：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿 的通道
②实例：葡聚糖、琼脂糖
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（3）凝胶色谱法的原理—分子筛效应
①大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或 琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿 的通道
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（四）缓冲溶液 1、概念
在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或 稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做 缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液
2、作用
能够抵制外界的酸或碱的对溶液的PH值的影响， 维持PH基本不变
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选用一定的物理或化学的方法分离具有不同 物理或化学性质的生物大分子
2、 蛋白质分离和提取的原理
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状 和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和 吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可 以用来分离不同蛋白质 血红蛋白的提取和分离(试用版)
（三） 分离蛋白质的方法1源自凝胶色谱法（别名分配色谱法）血红蛋白的提取和分离(试用版)
讨论：如何测定蛋白质的分子量？
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的 分子量时，可选用一组已知分子量的标准蛋白 同时进行电泳，根据已知分子量的标准蛋白的 电泳区带位置，用电泳迁移率和分子量的对数 作标准曲线，可以测定未知蛋白质的分子量。 市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的 标准蛋白试剂出售.
两个β一肽链
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四个亚铁红 素基团
血红蛋白的特点：
每个肽链环绕一个亚铁血红素 基团，此基团可携带一分子氧 或一分子二氧化碳，血红蛋白 因含有血红素而呈红色。
两个α－肽链 血红蛋白 两个β一肽链 血红蛋白的提取和分离(试用版)四个亚铁血红素基团
用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提 取血红蛋白的原因是什么？
丙烯酰胺和交联剂
N,N’-亚甲基双丙烯酰胺（形成交血联红）蛋白的N提,N取’和-亚分甲离基(试双用丙版烯) 酰胺的交联共聚反应
2、原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它 所带静电荷的多少以及分子的大小等因素 3、SDS作用
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 中加入SDS
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二、实验操作 （一）蛋白质提取和分离步骤
样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 （二）操作过程 1、样品处理
(1)血液组成
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①成分
血浆 血
水分 固体物质
血浆蛋白 无机盐
磷脂
液
白细胞
葡萄糖等
血细胞
血小板
两个a－肽链
血红蛋白
红细胞 （最多）
（90％）
C、H、O、N 3、相对分子质量
高分子化合物 血红蛋白的提取和分离(试用版)
4、基本组成单位 氨基酸
5、氨基酸通式 H
R C COOH
NH2 6、氨基酸连接方式
脱水缩合
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7、肽键 CO NH
8、分子结构
脱水缩合
盘曲折叠
氨基酸
肽链
蛋白质
（一条或者多条）
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