4、原理
9
基础知识
（一） 凝胶色谱法
原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相 对（分子质量较小 ）的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道，路程（较长 ），移动速 度（较慢 ），而（ 相对分子质量较大） 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能 在（凝胶外部 ）移动，路程（ 较短 ）， 移动速度（ 较快 ），相对分子质量不同 的蛋白质因此得以分离。
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（二）、缓冲溶液 缓冲溶液－－洗脱剂 组成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。
如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠， NaH2PO4/Na2HPO4等 作用：抵制外界酸碱对溶液pH的干扰，保持 pH与体 内环境基本一致。
15
基础知识
（三）电泳
16
基础知识
（三）电泳
阅读第65页的相关内容，回答以下问题： 1、电泳的概念； 2、电泳的原理； 3、电泳的种类； 4、SDS的作用。
10
11
• 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量
大的蛋白质
D
• A．路程较长，移动速度较慢
B
．路程较长，移动速度较快
• C．路程较短，移动速度较慢
D
．路程较短，移动速度较快
12
• 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中 的进行过程可表示为图中哪一个
•B
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（二）、缓冲溶液 1、 之前在什么地方遇见过缓冲物质？ 2、 缓冲物质有哪些？作用是什么？ 3、 本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？
生命活动的主要承担者
2
3
血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚 铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二 氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。
4
血红蛋白的提取和分离
本课题的主要内容如下：
样品处理 及粗分离
方法原理
纯化
方法原理
凝胶色谱法
纯度鉴定
方法原理
电泳
5
一、基础知识: 样品处理及粗分离的原理: 1 、分离生物大分子的基本思路是什么？ 2 、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？ 3 、为什么不用鸡的血红细胞而用猪的血红细胞作为 实验材料？ 4 、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质？
3. 该化合物是由 __2_条__α__-_肽__链___和__2_条__β__-_肽__链__
构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和
CO2结合的_亚__铁__血__红__素__基团。
返回
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1.洗 涤 红 细 胞
阅读思考：洗涤的目的是什么？
洗涤过程： 3g柠檬酸钠
吸出血浆 5倍体积生理盐水
血液 100mL
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(三)电泳 1.电泳的概念 指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程.
2．凝胶电泳法： （1）原理：
①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团， 在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。
②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电 极移动。
③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本 身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现 样品中各种分子的分离。
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：
1、含量
占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物
2、组成元素
C、H、O、N
3、相对分子质量 高分子化合物
4、基本组成单位： 氨基酸
结构简式：
种类：
R
5、氨基酸连接方式
脱水缩合
H C NH2
COOH
1
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：
6、肽键
6
一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 1、选用一定的物理或者化学方法分离具有不同
物理或化学性质的生物大分子。
2、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸 附性质、亲和力等千差万别。
提取 分离 方法
凝胶色谱法
7
基础知识
（一） 凝胶色谱法
阅读并回答
（P64）
1、凝胶色谱法另一个名称是什么？
2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据是什么？
泳
阳
结
极
果
20
血红蛋白的提取和分离
样品处理 粗分离 纯化
血液组成成分 1.洗 涤 红 细 胞 2.释放血红蛋白 3.分离血红蛋白
纯度鉴定
4.透析血红蛋白
跳转
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阅读思考：
血液组成成分
1. 血液由_血__浆___和_血__细__胞___两部分组成。
2. 血细胞中_红__细__胞___细胞数量最多，红细胞的含 量最高的有机化合物是__血__红__蛋__白_____。
低速离心 2 min
Байду номын сангаас
血浆 红细胞
红细胞
搅拌10min
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
23
采集得到猪血
24
初次离心后的结果
25
3次洗涤后的结果
返回
26
2.释放血红蛋白
阅读思考： 1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了
哪些物质？ 2. 为了加速释放过程，采取了什么措施？ ①目的分析： ②蒸馏水的作用是_____使__红__细__胞__大__量__吸__水__胀__裂_______。 ③加入甲苯的作用是___溶__解__红__细__胞__的__细__胞__膜_________。 ④充分搅拌的目的是___加__速__红__细__胞__的__破__裂___________。
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(2)血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯，
置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破 裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。
CO NH
7、分子结构 氨基酸 脱水缩合 肽链 盘曲折叠
（n条）
蛋白质
8、蛋白质多样性的原因： (多样性的根本原因)
氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多 端；多肽链的空间结构千差万别
9 、蛋白质的鉴定方法 双缩脲试剂
10、生理功能
细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的
主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切
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(三)电泳
（2）类型： 琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS) （3）SDS作用
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 中加入SDS。
电
泳
阳
结
极
果
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使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋 白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异
电
3、凝胶的实质是什么？
4、凝胶色谱法的原理是什么？
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基础知识
（一） 凝胶色谱法
1、凝胶色谱法的别名：分配色谱法 是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
2、依据的特性 蛋白质分子量的大小。
3、凝胶实质
①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道；
②化学本质：多糖类化合物： ③实例：葡聚糖、琼脂糖：