• 脱蜡、至水、染色：
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脱蜡剂：二甲苯
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脱水剂：酒精ຫໍສະໝຸດ •染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染
• 染色液
• 染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度 酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
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苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和
细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。
• 工具/原料
• 固定液——甲醛（福尔马林） • 脱水剂——酒精 • 透明剂——二甲苯 • 石蜡 • 脱蜡剂：二甲苯 • 至水剂：酒精 • 染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染色液 • 生理盐水、蒸馏水、PBS实验必备溶剂
适用范围 组织学、胚胎学、病理学教学与科研。
• he染色实验具体步骤
• 1 取材，固定：固定液——甲醛（福尔马林）
标准病理制片流程
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• HE染色操作步骤
• 苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常 用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细 胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红 为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成 分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学 教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
• 浸蜡，包埋：石蜡
• 将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全 浸入组织块后进行包埋，冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才 能在切片机上切成很薄的切片。
• 切片、展片、烤片：
• 将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下 的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒 温箱中烘干。
伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，
被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
• HE染色过程：
•1 • 将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。 •2 • 酸水及氨水中分色，各数秒钟。 •3 • 流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。 •4 • 入70％和90％酒精中脱水各10分钟。 •5 • 入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
•脱水、透明：
•染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。
•封片
•将已透明的切片滴上树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴 上标笺，切片标本就可使用。
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• 从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5 厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏 固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞 死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结 构。
• 修剪，脱水，透明：脱水剂——酒精
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透明剂——二甲苯
• 不同组织固定时间不同，固定成功后需要修剪25px*25px*5px， 放入包埋盒中，流水冲洗（去除组织中的固定液）30分钟。至于 不同浓度的酒精脱水，一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂， 逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于 石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精， 才能浸蜡包埋。