显微镜下进行。 适应于高度专业化的科学研究
毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微 生物。
显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢 子以获得纯培养。
小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在
显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的
分离。
第二章微生物纯培养
五、选择培养
为了从混杂的微生物群体中分离出某种 微生物，可以根据该微生物的特点，包括营 养、生理、生长条件等，采用选择培养的方 法进行分离。
1、涂布平板法（Spread Plate method）
步骤： 制板 稀释 加菌液 涂布 特点：简单易行，但易造成机械损伤
培养 挑菌落
第二章微生物纯培养
2、稀释倒平板法
步骤： 稀释 加菌液 浇培养基 培养
挑菌落
第二章微生物纯培养
1.取样
25g或25ml 检样
稀释样品的取样和倾注平皿
1mL
1mL
第二章微生物纯培养
2、富集培养
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同， 制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物 旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，更 容易从混杂的群体中分离到特定的微生物。
富集条件可从多方面选择，如温度、pH、紫外 线、高压、光照、氧气、营养等等。
例如：分离产芽孢细菌，可以对样品进行高温处 理，然后再进行培养。
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
六、微生物的保藏技术
基本要求：
保证菌种经过较长时间后仍保持生活能力，防止被 杂菌污染，形态特征和生理形状尽可能不发生变异。
用于长期保藏的原始菌种称为
保藏菌种或原种（stoch culture）。
第二章微生物纯培养
菌种保藏的原理
首先，要挑选典型菌种的优良纯种，最好采用它们 的休眠体进行保藏。
将待分离的样品进行连续稀释得到高度稀释的 效果, 如果经过稀释后的大多数试管中没有微生 物生长,那么有微生物生长的试管得到的培养物可 能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物.
这种方法适合于第二细章微生胞物纯较培养 大的微生物.
四、单细胞（单孢子）分离法
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或 单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
要点
接种环境消毒灭菌 酒精棉球消毒双手 开启的管口、瓶口靠近灯焰 拔出的棉塞勿触及任何地方 动作快，接种时间勿太长
必 备
第二章微生物纯培养
纠错
使用过的废液可以直接倒在水槽中 棉塞随意丢在桌上 将食物和饮料带入实验室内 做完实验未洗手就离开
第二章微生物纯培养
1ml无菌水
1：10稀释液 225mL无菌水
1mL
9mL稀释液 1：100
1mL
9mL稀释液 1：1000
1mL
每个稀释度
做两个平皿
1mL
1mL
1mL
1mL
倾注平皿
将 凉 至 46℃ 营 养 琼 脂 培 养 基 注 入 平 皿 约15ml，并转动平皿，混合第二均章匀微。生物纯培养
第二章微生物纯培养
微生物学
第二章 微生物的纯培养和显微技术
第二章微生物纯培养
基本概念
1、微生物的纯种分离：
将多种混杂的微生物，经某种技术或方法分离 或纯化的过程。
2、微生物的培养物（culture)：
在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物 群体。
纯培养物（pure culture)：在人为规定的条件下 培养、繁殖得到的只有一种微生物的培养物。
1、传代培养保藏方法
①斜面低温保藏法
方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。
1、利用选择培养基进行直接分 离
2、富集培养
第二章微生物纯培养
1、选择平板培养
根据微生物的特点，在培养基中加入一些抑制 剂，使不需要的菌不生长，需要的菌生长后有 一定特征，然后挑取单菌落。
分离抗生素抗性菌株，可在加有抗生素的平 板上分离。
分离蛋白酶产生菌，可在培养基中加入牛奶 或酪素，蛋白酶产生菌在平板上生长会形成透 明的蛋白质水解圈。
其次，创造一个使微生物代谢不活泼、生长受抑制的 环境条件（低温、干燥、缺氧、避光、缺少营养）。
再次，添加保护剂或酸碱中和剂，避免保藏过程中 细胞受伤。
第二章微生物纯培养
菌种保藏的方法
一种良好的菌种保藏方法
保持原菌的优良性状长期稳定 方法的通用性 操作的简便性 设备的普及性
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
3、菌落（colony):
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、 繁殖到一定程度形成的肉眼可见、有一定形态结构的子细胞 生长群体。当固体培养基表面众多菌落连成一片时便成为菌 苔。
4、培养平板（culture plate):
冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中所形成的培养 基固体平面，简称平板，是用于微生物纯培养的最常用的固 体培养基形式。
Байду номын сангаас
第二章微生物纯培养
3、平板划线法（Streak Plate）
步骤： 制板 接种环灭菌 挑菌落/ 菌液 划线 培养 挑菌落
特点：快速、方便。
第二章微生物纯培养
4、稀释摇管法（厌氧培养法） 用于厌氧菌的培养
灭菌石蜡 和固体石 蜡密封
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
三、用液体培养基获得纯培养
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
• 2.灭菌方法
★高压蒸汽灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 过滤除菌 火焰烧灼
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
• 3.操作环境
第二章微生物纯培养
• 4.操作过程
必 备
第二章微生物纯培养
No Image
第二章微生物纯培养
无菌操作箱
第二章微生物纯培养
哪个正确？
第二章微生物纯培养
谁的操作比较规范？
第二章微生物纯培养
二、用固体培养基获得纯培养
适用于大多数细菌、酵母菌以及许多真菌和单 细胞藻类。 1、涂布平板法（Spread Plate method） 2、稀释倒平板法 3、平板划线法（Streak Plate） 4、稀释摇管法（厌氧培养法）
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
第一节 微生物的分离和纯培养
一、无菌技术的定义和意义
无菌技术（aseptic technique）
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物 污染，其自身也不污染操作环境的技术被称为无菌技术 。 它是保证微生物学研究正常进行的关键。
第二章微生物纯培养
• 1.微生物培养的常用器具