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2.1 S期DNA 合成阻断法
2.1.1 S期DNA 合成阻断法：选用DNA 合成 抑制剂可逆地抑制DNA 合成而不影响其他 期细胞沿周期运转，最终可将细胞群体阻 断在S期。高浓度TdR 对S期细胞的毒性较 小，阻断效果较好，因此成为较常使用的S 期阻断剂
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• 2.1.2 TDR双阻断法: 是最常使用的方法 向 对数增殖期的培养细胞的培液中加入TdR ， 使细胞阻于S期和G1-S 期交界处。移去 TdR ，洗涤细胞。当释放时间大于ts 时， 所有细胞均脱离S期，这时再给予第二次 TdR 阻断。细胞群体再经过G2+M+G1 的 时间，则细胞阻断于G1-S 交界处的一个狭 窄的区段中（tG1+tG2+tm ＞ts ）。
细胞周期同步化
• 1.主要内容 • 2.同步化的方法
• 讲解人 生工二班 0912402045 陈春玉
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内容
• 细胞周期同步化是为了某种目的，使处于 细胞周期不同阶段的细胞群体中的所有细 胞，处于细胞周期的同一时期的过程。
• 有自然同步化和人工同步化
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同步化方法
• 1.自然同步化 • 2.人工同步化 • （1）人工选择同步化 • （2）人工诱导同步化
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DNA合成阻断法优缺点
• 优点：同步化程度高，适用于任何培养体 系，可将几乎所有的细胞同步化。
• 缺点：诱导过程造成细胞非均衡生长(蛋白 质、RNA 合成并不停止)，细胞体积增大， 较正常细胞在周期上有差异，有时出现有 丝分裂和染色体的异常。
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2.2 DNA分裂中期阻断法
• 某些药物可抑制微管的聚合，将细胞阻断 于有丝分裂中期。非平衡生长问题不十分 明显。但长时阻断释放后许多细胞不能恢 复正常的细胞周期。
• 中期阻断药物最常用者为秋水仙素或其衍 生物秋水仙酰胺。
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DNA分裂中期阻断法的优缺点
• 优点：操作简便，效率高 • 缺点：这些药物的毒性相对较大，若长时
阻断释放后许多细胞不能恢复正常的细胞 周期运转。胞周期同 步化中应用
• 将以分离的条件突变菌株转移到限定条件 下培养，所有细胞便被同步化在细胞周期 中某一特定时期
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1.自然同步化
• 自然同步化在自然界中，细胞自然同步化 的现象在动、植物及粘菌中都有所发现， 它们不受人为条件的干扰，因而有可能在 接近自然的条件下进行观察。
• 缺点：自然同步化受到很多条件的限制。
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（1）.人工选择同步化
• 人工选择同步化：人为的将处于不同细胞 周期的细胞分离开，从而获得不同时期细 胞群体的方法。
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密度梯度离心法
• 根据周期时相不同而细胞大小不同。 • 此法的优点是：简单、成本低。 • 缺点是：同步程度有限，因同一时相的细
胞大小并非都一致，而且对大多数种类的 细胞不适用。
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（2）人工诱导同步化
• 2.1 S期DNA 合成阻断法 • 2.2 DNA分裂中期阻断法 • 2.3 条件倚赖性突变株
• 人工选择同步化的方法：
（1）.有丝分裂选择法密
（2）度梯度离心法
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有丝分裂选择法（反复振摇法）
• 利用有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的 附着性降低的特点。此法的特点是细胞不 受药物等的伤害，同步化程度高，放入 37℃环境中，收集的细胞即可同步分裂。 缺点是分裂细胞一般占1%-2 ％，分离的细 胞数量少。