4.5 分光光度测定方法
中文词条名：差示分光光度法
英文词条名：differential spectrophotometry
分光光度法中，样品中被测组分浓度过大或浓度过小(吸光度过高或过低)时，测量误差均较大。

为克服这种缺点而改用浓度比样品稍低或稍高的标准溶液代替试剂空白来调节仪器的100%透光率（对浓溶液）或0%透光率（对稀溶液）以提高分光光度法精密度、准确度和灵敏度的方法，称为差示分光光度法。

差示分光光度法又可分高吸光度差示法，低吸光度差示法，精密差示分光光度法等。

4.5.2 差示分光光度法
吸光度A在0.2-0.8范围内误差最小。

超出此范围，如高浓度或低浓度溶
液，其吸光度测定误差较大。

尤其是高浓度溶液，更适合用差示法。

一般分光光度测定选用试剂空白或溶液空白作为参比，差示法则选用一已知浓度的溶液作参比。

该法的实质是相当于透光率标度放大。

高吸收法在测定高浓度溶液时使用。

选用比待测溶液浓度稍低的已知浓度溶液作标准溶液，调节透光率为100%。

低吸收法在测定低浓度溶液时使用。

选用比待测液浓度稍高的已知浓度溶液作标准溶液，调节透光率为0。

最精密法是同时用浓度比待测液浓度稍高或稍低的两份已知溶液作
标准溶液，分别调节透光率为0或100%。

设试样浓度为，以溶剂作参比时，其透光率为，吸光度为。

若选浓度为(其以溶剂为参比时的透光率为，吸光度为)的已知溶液作参比，调节透光率为100%。

根据吸收定律，有：
溶剂作参比时，；(4.14)
；(4.15) 差示法，用已知浓度的溶液作参比时，
(4.16)
，(4.17)
(4.16)式为差示分光光度法的基本关系式。