附：uv-2450使用说明
1、打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。 2、单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖 3、完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式”，设定波长及测量方式 （Abs） 4、将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动 清零键清零。 5、取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。 6、取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中，打开定量分析界面， 设定波长和测量方式Abs，测定各点吸收值，绘图 7、放入待测样品，测定
示差分光光度法测定水样 中非那西汀的含量
指导教师 姜桂兰
实验目的
1、通过标准曲线的绘制及样品溶液的测定，
了解示差分光光度法的原理及操作步骤 2、掌握UV-2450型紫外-可见分光光度计的使 用方法
实验原理
一、UV-2450型紫外－可见分光光度计基本组
成及其工作原理 二、示差分光光度法的原理
UV-2450紫外-可见分光光度计， 石英比色皿（1cm）， 容量瓶（50ml）， 移液管（1ml、10ml）， 未知样品液。

实验方法及步骤



1.标准溶液的配制 非那西汀标准溶液（100μg/ml）：准确称取非那西汀 0.0500g于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移到500ml容量 瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用 2.吸收曲线绘制 移取5.00ml非那西汀标准溶液于50ml容量瓶中，蒸馏水 稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行全波长扫描，绘 制吸收曲线，找出最大波长。



3.绘制工作曲线 取非那西汀标准溶液5ml，10ml，15ml，20ml，30ml分别 于5个50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于最大波长处 测定吸光度值，以A对c作图绘制工作曲线。 4.样品测定 取10ml样品（浓度在40-60μg/ml）于50ml容量瓶中，蒸馏 水稀释至刻度，摇匀，于最大波长处测定吸光度值。
２、示差分光光度法的测定步骤： 1）采用浓度为Cs的标准溶液为参比溶液;
2）测定一系列Δ C已知的标准溶液的相对吸光度(Ar)；
3）绘制Ar-Δ C工作曲线； 4）由测得试样溶液的相对吸光度Ar,x，即可从Ar－Δ C工作 曲线上求出Δ C； 5)根据下式求出试样浓度Cx ： Cx＝Cs+Δ C
试剂与器材
操作规程
1.打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。 2.单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖 3.完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式”，设定波长及测量方式 （Abs） 4.将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动 清零键清零。 5.取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。 6.取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中，打开定量分析界面， 设定波长和测量方式Abs，测定各点吸收值，绘图 7.放入待测样品，测定
例：若普通的分光光度法测得试样的T=5.0%, 配制一浓度 稍低的标准溶液S,测得T=10.0%, 二者之差为5%;用差示
法时，以此标准溶液S来调节仪器令T=100%,再来测定
试样X,可得T=50.0%, 二者之差为50%。这样，差示法相 当于把标尺扩大了10倍，测量读数的相对误差也就缩小 了10倍。
一、UV-2450型紫外－可见分光光度计基 本组成及其工作原理
1.分光光度法
利用紫外-可见吸收光谱对物质进行定性和定量分析的方 法就是紫外-可见分光光度法，属于分子吸收光谱，由分子 的外层电子跃迁产生，是宽带吸收光谱。 物质对光吸收遵循朗伯-比尔定律，即当入射光波长一 定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比。
二、示差分光光度法原理及测量方法
１、示差分光光度法原理
示差分光光度法是应用于高含量组分测定的一种方法。
普通分光度法一般只适合于测定痕量组分，当待测组分 含量较高时，往往于朗伯-比尔定律产生偏离或因测得的吸光 度值超出适宜的的读数范围而引入较大的误差，使准确度降 低。而示差法却能很好的解决这一问题。两者的主要区别在 于参比溶液不同，普通的分光光度法采用不含已显色被测组 分的空白作参比溶液，而示差分光光度法则采用一合适浓度 的标准溶液作参比溶液。
3.UV-2450型紫外－可见分光光度计
日本岛津 单单色器、双光束方式、光电倍增管检测器 特点

1.低杂散光，高光通量，可对高浓度的样品不进行稀释直
接测定 2.应用广泛：可用于分析有机、无机化合物；DNA、酶 等生化样品；光学材料的特性 3.配备了功能强大的UVProbe软件，包含光谱测定、光 度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测 定到研究解析都可通过它实现。
差示测定试液浓度(Cx)时，采用浓度稍低于试样的标准溶液 (Cs)作参比溶液调节仪器透光度读数为100％(A=0)，再测定试样 溶液的吸光度(Ar称为相对吸光度)，相对应的透光度(Tr)称为相 对透光度。 普通光度法以纯溶剂或空白试剂作参比溶液，测得标准溶液 及试液的吸光度分别为As和Ax，对应的透光度为Ts和Tx，根据比 尔定律 Ax＝ε bCx，As＝ε bCs Ar＝Ax－As＝ε b(Cx-Cs)＝ε bΔ C 上式意义：在符合比尔定律测定浓度范围内，示差法测得的 相对吸光度(Ar)与被测溶液和参比溶液的浓度差(Cx－Cs,即Δ C) 或成正比，即可用于定量测定。此时试液的Tr,x＝50％，令读数 落在适宜的范围内，提高了测定的准确度。
3）样品室
样品室放置各种类型的吸收池 （比色皿）和相应的池架附件。吸
收池主要有石英池和玻璃池两种。
在紫外区须采用石英池，可见区一 般用玻璃池。
4）检测器
利用光电效应将透过吸收池 的光信号变成可测的电信号，常 用的有光电池、光电管或光电倍 增管。
5）结果显示记录系统
检流计、数字显示、微机进行 仪器自动控制和结果处理
2.分光度计的基本组成
光源
单色器
样品室
检测器
显示
1）光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具
有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～ 2500 nm。
紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。
2）单色器
将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波 长单色光的光学系统。
实验结果
1.绘制非那西汀的吸收曲线
2.绘制工作曲线 3.可由显示器直接读出测定结果，记录
实验注意事项


1.仪器使用时要符合仪器工作环境的要求: 稳固的工作台 ，适宜的温度、湿度， 避免：日光直射、震动、强电场、强磁场。 2.仪器保养和维护方法 ： 用软布稍微蘸取水，轻柔擦拭外表面，避免蘸取过多水而流 入仪器内部。 清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。 3.每半年进行一次波长准确度检查。 4.比色池的使用规则 1）手拿部位：毛玻璃面 2）用镜头纸擦拭透光面 3）用后及时清洗，放入比色池盒内。 5. 注意人身安全和仪器安全